Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная. Временное наставление по применению противоящурной гидроокисьалюминиевой формолвакцины из лапинизированного вируса ящура
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины против ящура типа А. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером № 2045/Киргизия/2007-ДЕПА № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, адъюванты гидроокись алюминия с сапонином и поддерживающую среду в эффективных соотношениях. Вакцина обладает высокой иммуногенностью и способна обеспечить эффективную защиту от возбудителя инфекции ящура, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока. 11 з.п. ф-лы, 14 табл., 1 ил, 4 пр.
Рисунки к патенту РФ 2526570
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении вакцины против ящура типа А инактивированной сорбированной.
Ящур - это острое контагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных. Для него характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями молока, мяса и других видов животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность. Для обеспечения устойчивого благополучия страны по ящуру в Российской Федерации реализуется система мероприятий, приоритетными в которой являются предупреждение заноса вируса ящура на территорию, а в районах высокой степени риска - вакцинопрофилактика. В настоящее время в Российской Федерации и странах СНГ для иммунизации крупного и мелкого рогатого скота против ящура применяют, как правило, инактивированные сорбированные, а для иммунизации свиней - инактивированные эмульсионные вакцины .
Технология изготовления противоящурной вакцины из инактивированного вируса начинается с подбора производственных штаммов на основе эпизоотологического анализа динамики ящура в стране и сопредельных государствах. При создании препаратов для специфической профилактики используют соответствующие типы вируса ящура и подбирают штаммы с широким антигенным спектром внутри типа с выраженной перекрестной иммуногенностью. Штамм с широким спектром иммуногенности и удовлетворяющий требованиям региона выбирают с помощью его испытания в реакции перекрестной защиты или чаще в реакции перекрестной нейтрализации. Как правило, в качестве производственного штамма используется популяция вируса, которая в совокупности с системой и условиями промышленного культивирования обеспечивает гарантированное и высокое накопление 146S и 75S компонентов вируса и получение иммуногенной вакцины.
Кроме того, к производственному штамму предъявляются требования стабильности вируса в процессе очистки от тканевых компонентов и концентрирования, а также сохранения вируса при инактивации и длительном его хранении .
Возбудитель ящура обладает значительной антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях и зависит от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других различных факторов. Антигенная изменчивость вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков . Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью вызывают ослабление специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном. Они вызывают также затруднения штаммоспецифической диагностики.
В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.
Известны штаммы вируса ящура типа А, использовавшиеся в качестве производственных на территории СССР и РФ в течение последних 50 лет.
К ним относятся следующие штаммы: А 7 № 103, выделенный в 1962 году в Куйбышевской области; А 7 № 2, выделенный в 1965 году в Таджикской ССР; А № 717/73, выделенный в 1973 году в Ставропольском крае.
Указанные штаммы использовались для получения диагностикумов и противоящурных вакцин, применявшихся в различных регионах страны.
Однако после ликвидации ящура, вызываемого близкими им в антигенном отношении штаммами вируса, они были сняты с производства и в настоящее время поддерживаются лишь в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» .
Известна вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма A 22 № 550, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъюванта и поддерживающей среды в эффективном соотношении .
Штамм А 22 № 550 вируса ящура выделен в 1964 году в Азербайджане и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах постсоветского пространства .
Известна инактивированная сорбированная вакцина из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721 вируса ящура Aphtae epizooticae типа A, выделенного в 1999 году в Республике Грузия .
Известна инактивированная сорбированная вакцина из штамма № 1707 «Армения-98» вируса ящура Aphtae epizooticae типа А .
Вакцина против вируса ящура типа A из производственного штамма A № 1707 «Армения-98», применявшегося в буферной зоне Закавказья.
Недостатки вакцин, изготовленных из данных штаммов, состоят в недостаточной антигенной и иммуногенной активности относительно эпизоотических изолятов вируса ящура типа A, циркулирующих в настоящее время в странах Закавказья, Центральной Азии и Ближнего Востока (Турция, Иран и т.д.) ввиду имеющихся существенных антигенных отличий.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа A, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъювантов ГОА с сапонином и поддерживающую среду в соотношении, мкг:
Штамм A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП выделен в 1999 году в Республике Грузия и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ .
В качестве чувствительной биологической системы используют суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,6.
Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей используют полигексаметиленгуанидин (ПГМГ), а для инактивации вируса - аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). Для нейтрализации АЭЭИ в суспензию добавляют тиосульфат натрия.
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721 представляет собой суспензию преимущественно из 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура. В качестве адъювантов используют ГОА с сапонином.
Основной недостаток известных вакцин, в том числе и вакцины-прототипа, состоит в антигенных отличиях от изолятов вируса ящура типа A, выделенных в различные временные промежутки, и приготовленные на их основе вакцины обеспечивают эффективную защиту животных только против заражения гомологичным вирусом.
В 2003 году на территории Ирана был выделен новый изолят вируса ящура типа A, значительно отличающийся от ранее изученных штаммов этого типа. В течение 2005÷2006 гг. ящур типа A получил широкое распространение в странах Западной Азии - Иране, Турции, Саудовской Аравии и Пакистане. В феврале 2006 года ящур типа A линии Иран/05 попал во Фракию - европейскую часть Турции, которая граничит с Болгарией и Грецией. Проведение 100% вакцинации всех жвачных с применением штамма A 22 во Фракии в феврале-марте 2006 г. предотвратило распространение ящура в соседние Грецию и Болгарию, однако через 3÷4 месяца появились свежие случаи заболевания .
В связи с этим возникла необходимость получить новую вакцину против вируса ящура серотипа A из штамма А № 2045/Киргизия/2007 для обеспечения безопасности территории России и сопредельных государств от этого возбудителя.
В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вакцины противоящурной инактивированной сорбированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала инактивированных сорбированных вакцин против ящура типа A.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против ящура типа A инактивированной сорбированной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.
Предлагаемая вакцина содержит в 1 см 3 препарата: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученного предпочтительно в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в количестве не менее 3,0 мкг и целевые добавки: ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг, сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг и поддерживающую среду в количестве до 1000000,0 мкг.
Исходный вирус для получения штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП выделен в 2007 году в Республике Киргизия. Штамм получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первично трипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным культурам ВНК-21, IBRS-2 и ПСГК-30.
Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,8.
Для инактивации вируса используют АЭЭИ, который добавляют в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025÷0,05%. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия .
Полученный антиген очищают от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносят в суспензию до концентрации 0,005÷0,007% .
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура.
Количественное и качественное содержание вирусного сырья определяют методом турбидиметрии .
Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1 см 3 не менее 0,5 мкг 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.
Необходимую концентрацию 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура в предлагаемой вакцине, составляющую не менее 3 мкг в 1 см 3 готового препарата, получают путем добавления в авирулентный и очищенный антигенный материал расчетного количества адъюванта-сорбента ГОА. Оптимальным является содержание ГОА в 1 см 3 готового препарата в диапазоне от 11000,0 мкг до 15000,0 мкг.
К полученному концентрату добавляют дополнительно 10% водный раствор сапонина из расчета 1500,0 мкг на прививную дозу. Например, для оптимальной прививной дозы 2 см 3 конечная концентрация составляет 0,075%, что соответствует 750,0 мкг его содержания в 1 см 3 готового препарата.
Полученная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП в эффективном количестве.
3. Целевые добавки.
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная.
2. Активное вещество.
3. Целевые добавки.
По сравнению с вакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A в эффективном количестве.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования.
1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
3. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
4. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
5. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант-сорбент ГОА.
6. ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
7. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант сапонин.
8. Сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
9. В качестве целевой добавки вакцина содержит поддерживающую среду.
10. Поддерживающая среда в количестве до 1000000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
11. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A, ГОА, сапонин и поддерживающую среду в соотношении, мкг:
Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вируса ящура серотипа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.
Достижение технического результата от использования изобретения достигается тем, что в состав предлагаемой вакцины введен в качестве активного вещества антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серотипа A, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивающего получение противоящурной вакцины сорбированной инактивированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа A, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 является новым, ранее неизвестным . Исходный вирус для получения штамма A № 2045/Киргизия/2007 был выделен из проб афтозного материала от больной телки, поступивших в ФГУ «ВНИИЗЖ» в декабре 2007 года из Республики Киргизия (экспертиза № 2045 «Киргизия/07»). Производственный штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.
Полученный штамм депонирован 7 июля 2009 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным номером (ссылкой): производственный штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП вируса ящура типа A.
Штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП вируса ящура типа A характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические свойства
Штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу A и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура относится к серотипу A. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА, РДП и РМН.
При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа A штамма A № 2045/Киргизия/2007 индуцирует образование вирусспецифических и вируснейтрализующих антител, выявляемых в РСК в разведениях 1:80÷1:160 и в ИФА в разведениях 1:10000÷1:12000.
Антигенное родство штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A с производственным штаммом вируса ящура A 22 № 550 и штаммами, ранее выделенными на Азиатском континенте, изучено в РСК, ИФА и РМН.
Результаты исследований в РСК представлены в таблице 1. Антигенное родство (R) штамма A № 2045/Киргизия/2007 с другими вирусами ящура серотипа A составило для A/Иран/97 - 8%, A 22 /Ирак 24/64 - 28%, A/Иран/05 - 68%, A/Турция/06 - 66%, A 22 № 550 - 14%.
Результаты исследований в РМН представлены в таблице 2. Антигенное соответствие (r 1) составило для A/Иран/97 - 0,125, A 22 № 550 - 0,17, A 22 /Ирак 24/64 - 0,6, A/Турция/06 - 0,5. При значении r 1 >0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близко родственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r 1 <0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса .
Результаты исследований в ИФА представлены в таблице 3. Антигенное соответствие (r 1) составило для A 22 № 550 - 0,24, A 22 /Ирак 24/64 - 0,24, A/Иран/97 - 0,19, A/Турция/06 - 0,5. При значении r 1, равном 0,4÷1,0, полевой изолят и производственный штамм находятся в близком антигенном родстве; при значении r 1 0,2÷0,39 полевой изолят антигенно родственен производственному штамму, вакцина из производственного штамма может быть использована, если не будет найдено более родственного штамма, и при условии, что животные будут иммунизированы более 1 раза; при значение r 1 <0,2 полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из которого не приемлема для защиты от заражения полевым вирусом .
Молекулярно-генетическая характеристика
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP 1 вируса ящура типа A штамма А № 2045/Киргизия/2007 и выведена первичная структура белка VP 1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A имеет близкое филогенетическое родство со штаммами A/Иран/05 и A/Турция/06 (процент нуклеотидных различий 3,82÷4,3 и 4,46÷5,57 соответственно) и значительно отличается от вакцинного штамма A 22 № 550. Кроме того, он отличается от штаммов вируса этого типа, выделенных в 1998 г. в Армении и Турции, а также в Грузии и Иране в 1999 г. (смотри дендрограмму). Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A со штаммами вируса ящура серологического типа A составила: со штаммом A 22 № 550 - 18,15%, со штаммом A № 1707 «Армения-98» - 17,68%, со штаммом A/Турция/98 - 17,2%, со штаммом A (Грузия) 1999/ № 1721 - 18,79%, со штаммом A/Иран/99 - 17,68%.
Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A принадлежит к новой генетической линии вируса ящура серологического типа A.
Биотехнологические характеристики
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21 и IB-RS-2, и в течение 20÷24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений от 6,33 до 8,25 lg ТЦД 50 -/см 3 (таблица 4). При массированном заражении (1÷10 ТЦД/клетку) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).
Хемо- и генотаксономическая характеристика
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×10 6 Д.
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочечной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×10 6 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP 1 , VP 2 , VP 3 и VP 4 . Липопротеидная оболочка отсутствует.
Основным антигенным белком является VP 1 . В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (BP 56a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.
Физические свойства
Масса вириона составляет 8,4×10 -18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см 3 .
Устойчивость к внешним факторам
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при pH 7,2÷7,6. Сдвиги pH как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса.
Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, -облучению, высоким температурам.
Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.
Вирулентность - вирулентен для естественно восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей.
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации.
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа A.
Для снижения его эпизоотической опасности необходима своевременная вакцинопрофилактика вновь возникающих очагов болезни, для чего необходимы актуальные высокоиммуногенные вакцины.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем признакам предлагаемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вакцины, изложенных в независимом пункте формулы.
Следовательно, заявляемая вакцина соответствует уровню патентоспособности «новизна».
Для проверки соответствия предлагаемой вакцины условию патентоспособности «изобретательский уровень» проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемой вакцины преобразований для достижения технического результата.
Следовательно, предлагаемая вакцина соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень».
Сущность изобретения пояснена в перечнях последовательностей, в которых:
SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP 1 штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A.
SEQ ID NO:2 последовательность аминокислот белка VP 1 штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A.
Сущность изобретения пояснена на дендрограмме, отражающей филогенетические взаимоотношения штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серологического типа A с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура типа A. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP 1 .
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вирус ящура типа A был изолирован из полевого материала, поступившего в ФГУ «ВНИИЗЖ» в виде эпителия афт от КРС, подозреваемого в заболевании ящуром, при проведении лабораторной диагностики этого заболевания и дифференциации его от других везикулярных болезней. При изоляции вируса использован комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов.
Биологические и вирусологические методы включали инокуляцию материала полевого изолята КРС и последующую адаптацию вируса к культурам первично трипсинизированных и перевиваемых линий клеток. Были использованы культуры клеток СП, ПСГК-30, IB-RS-2 и ВНК-21. Первичные и перевиваемые культуры клеток для постановки биопробы выращивали на соответствующих питательных средах в стационарных условиях во флаконах емкостью 50÷100 см 3 , отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1÷10 ТЦД 50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% ГЛА и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали хлороформом в отношении 1:10. После 30-минутного инкубирования при 37°C во флаконы вносили по 5÷10 см 3 поддерживающей среды и инкубировали при 37°C до появления ЦПД вируса. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000g в течение 15 минут. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК и ИФА на наличие вирусного антигена, при этом использовали набор коммерческих типоспецифических сывороток и сыворотки, хранившихся в музее штаммов ФГУ «ВНИИЗЖ».
Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 4.
Данные, приведенные в таблице 4, свидетельствуют о хорошей адаптационной активности штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A к использованным клеточным культурам.
Изолированный с помощью перечисленных методов вирус был исследован в РСК с набором диагностикумов на все типы вируса ящура, с целью идентификации типовой принадлежности.
Результаты типирования вируса в РСК представлены в таблице 5.
Приведенные в таблице 5 результаты свидетельствуют о том, что выделенный вирус относится к типу A.
Вакцину против ящура типа A инактивированную сорбированую готовят из вируса штамма A № 2045/Киргизия/2007, выращенного в суспензионной культуре клеток ВНК-21. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,8. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,001÷0,05 ТЦД 50 на клетку.
Культивирование вируса ведут при температуре 36÷37°C. Через 11÷13 часов инкубирования проводят подсчет живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15÷20%, то инкубирование продолжают еще 2÷3 часа. При достижении количества мертвых клеток 90÷95% культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S и 75S компонентов. Количество 146S+75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см 3 .
В таблицах 6, 7, 8 и 9 приведены результаты культивирования штаммов A № 2045/Киргизия/2007, A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП, A № 1707 «Армения-98-ДЕП» и A 22 № 550 вируса ящура типа A, из которых следует, что культуральные свойства перечисленных штаммов существенно отличаются по двум изученным параметрам:
1) штамм A № 2045/Киргизия/2007 имеет более короткий период репродукции (12,5 часа) по сравнению со штаммом A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП и A № 1707 «Армения-98-ДЕП» (15÷16 часов);
2) штаммы A № 2045/Киргизия/2007 и A 22 № 550 дают более высокий процент выхода иммуногенных компонентов (90,1% и 89,9% соответственно) по сравнению со штаммами A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП и A № 1707 «Армения-98-ДЕП» (61,5% и 58,1% соответственно).
Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15÷20% раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до pH 8,0÷8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025÷0,05%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12÷24 часов при 36÷37°C и pH 7,2÷7,6 с перемешиванием через 5÷6 часов в течение 3÷5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.
В теплую суспензию добавляют 10% раствор ПГМГ до концентрации 0,005÷0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.
В таблице 10 приведены результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S и 75S) компоненты вируса ящура штаммов A № 2045/Киргизия/2007 и A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП.
Приведенные в таблице 10 данные свидетельствуют о том, что иммуногенные компоненты вируса ящура штамма A № 2045/Киргизия/2007 не уступают в устойчивости к инактивации и очистке в условиях производства вирусу ящура штамма A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП. Особенно важным является тот факт, что в процессе инактивации и очистки вируса из штамма A № 2045/Киргизия/2007 не произошло существенных изменений в количестве 146S и 75S компонентов, полученных при репродукции вируса.
Полученный антиген контролируют на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность. Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в прививной дозе адсорбированной вакцины получают путем концентрирования антигена ГОА.
Расчетный объем ГОА 3% концентрации добавляют в охлажденную суспензию антигена при работающей мешалке. Перемешивание ведут в течение 30 минут. После седиментации ГОА сливают расчетный объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна быть в пределах 1,62±0,488 Р<0,01 мг/см 3 n=10, а концентрация 146S и 75S компонентов вируса ящура, по меньшей мере, 3,0 мкг/см 3 готового препарата. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10% раствор сапонина до конечной концентрации 0,05÷0,15%, что соответствует 500,0÷1500,0 мкг сапонина в 1 см 3 готовой вакцины.
Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и проводят контроль ее стерильности в соответствии с ГОСТ 28085.
Авирулентность и безвредность вакцины проверяют на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или на морских свинках.
Полученная вакцина представляют собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым белым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.
Оптимальный компонентный состав полученной адсорбат-вакцины против ящура типа A приведен в таблице 11.
Авирулентность и безвредность вакцины проверили на 5 головах КРС. Препарат вводили каждому животному под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток.
По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность. Испытание провели на 4 головах телят массой 70÷80 кг. Адсорбат-вакцину вводили подкожно в дозе 2,0 см 3 . Контрольное заражение телят проводили гомологичным штаммом вируса ящура на 28 день после вакцинации (ДПВ). Результаты исследований представлены в таблице 12.
Приведенные в таблице 12 данные показали, что заболел 1 теленок из 4 голов, 3 были защищены от генерализации процесса на 28 день после вакцинации. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных составил 4,81±0,53 log 2 .
Проведены испытания адсорбат-вакцины против ящура типа A, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мкг:
Авирулентность и безвредность полученной вакцины проверили на 5 головах КРС. Препарат вводили каждому животному под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток после заражения.
По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность. Испытание провели на 5 головах КРС массой 250÷300 кг и 5 головах телят массой 70÷80 кг. Адсорбат-вакцину вводили подкожно в дозе 2,0 см 3 . Контрольное заражение проводили гомологичным штаммом вируса ящура на 28 день после вакцинации (ДПВ) для телят и на 90 день для быков. Результаты исследований представлены в таблицах 13÷14.
Приведенные в таблицах 13÷14 данные показали, что заболел 1 бык из 5 голов, а 4 были защищены от генерализации процесса на 90 день после вакцинации а, все 5 голов телят были защищены от генерализации процесса на 28 день после вакцинации. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных на момент заражения составил 5,00±0,27 log 2 для быков и 6,20±0,63 log 2 для телят, что свидетельствует об эффективности испытанной вакцины.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемой вакцины следующей совокупности условий:
вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
Для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью приведенных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
вакцина против ящура типа A сорбированная инактивированная, изготовленная из штамма A № 2045/Киргизия/2007 в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.
Источники информации
1. Bojko A. A. Declaration sur I apparition en URSS d un type virus aphteux different des souches de type A anterieurement etudiees dans le Pays. BOIE, 1965, 64, V. 2. - P. 1075-1077.
2. Pepep X. Ящур: пер. с нем./ Г.А.Сурковой; под ред. и с предисл. П.В. Малярца. - М.: Колос, 1971. - 432 с.
3. Ящур: монография / А.Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец [и др.]. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.
4. Вирусные болезни животных / В.Р. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев [и др.]. - М.: ВНИИТИБП, 1998. - С.532-548.
5. Временная инструкция по изготовлению и контролю противоящурной концентрированной гидроокись алюминиевой формолвакцины из лапинизированного вируса A 22 . Утверждена ГУВ СССР 25.03.1971 г.
6. Промышленный регламент на производство вакцины против ящура типов A, O, C, Азия-1, Сат-1, Сат-2 и Сат-3 инактивированной сорбированной моно- и поливалентной (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21): утв. Директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 11.09.2009. - Владимир, 2009. - 216 с.
7. Промышленный регламент на производство вакцины против ящура инактивированной эмульсионной моно- и поливалентной для профилактики ящура свиней (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21): утв. Директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 11.09.2009. - Владимир, 2009. - 240 с.
8. Пат. РФ 2294760, МПК A61K 39/135, Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа A/ В.В. Михалишин, Т.Н. Лезова, А.В. Щербаков, Д.В. Михалишин, Н.С. Мамков; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 21.12.2004; опубл. 10.06.2006 г. (прототип).
9. Пат. РФ 2140452, МПК A61K 39/135, Штамм N 1707 "АРМЕНИЯ-98" вируса ящура типа A для изготовления диагностических и вакцинных препаратов/ В.М. Захаров, В.К. Спирин, А.И. Гриценко [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 15.03.1999; опубл. 27.10.1999 г.
10. Пат. РФ 2242513, МПК A61K 39/135, Штамм A (ГРУЗИЯ) 1999/ № 1721 вируса ящура типа A для изготовления диагностических и вакцинных препаратов; ФГУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 24.11.2003; опубл. 20.12.2004 г.
11. Foot-and-mouth Disease. Sitiation worldwide and major epidemiological events in 2005-2006/ K. Sumption, J. Lubroth, T. Murrai, S. De la Rocque// Empress/Focus on. - 2007. - № 1.
12. Пат. РФ 594771, МПК A61K 39/12, Средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов/ Н.А. Улупов, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий, Д.С.Жук; ВНИЯИ - Заявл. 07.05.1973; опубл. 07.07.93 г.
13. Пат. РФ 2054039, МПК A61K 39/135, Способ очистки и стерилизации культурального вируса ящура/ Т.Н. Лезова, Н.А. Улупов, В.В. Борисов, В.В. Михалишин, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий; ВНИЯИ - Заявл. 07.02.1992; опубл. 10.02.1996 г.
14. Авт.свид. СССР 784335, C12Q 1/02, Способ определения качества вирусного сырья/ А.Ф. Бондаренко; ВНИЯИ - Заявл. 04.07.1979; опубл. 20.03.2000 г.
15. Пат. 2451745 Российская Федерация, МПК A61K 39/135, Штамм A 2045/Киргизия/2007 вируса ящура Aphtae epizooticae типа A для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа A/ Е.В. Белик, В.В. Борисов, А.В. Щербаков, С.Р. Кременчугская [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 26.07.2010; опубл. 27.05.2012 г.
16. OIE. Manual of diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial animals (Mammals, Birds and Beers). - 6 th ed. - Paris, 2008. - Vol.1.- P 203÷207.
17. Selection of foot and mouth disease vaccine strains - a review/ D.J. Paton, J.F. Valacher, J. Bregman // Rev. Sci. Techn. OIE. -2005. - Vol.24, № 3. - P. 981÷993.
| Таблица 1 | |||
| Антигенный спектр штамма А № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серотипа А по данным РСК | |||
| Сравниваемые штаммы | Показатели | ||
| r 1 | r 2 | R% | |
| А/Иран/97 | 0,05 | 0,11 | 8 |
| А22/Ирак 24/64 | 0,08 | 1 | 28 |
| А/Иран/05 | 0,46 | 1 | 68 |
| А/Турция/Об | 0,59 | 0,76 | 66 |
| А22 № 550/64 | 0,02 | 1 | 14 |
| Примечание: R s: 40% - штаммы вируса ящура относятся к одному подтипу R=(%): 25÷40 - к разным подтипам. |
|||
| Таблица 4 | ||||
| Биологические свойства вируса эпизоотического штамма А № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа А | ||||
| Система репродукции вируса | Время проявления биологической активности (часы) | Количество адаптационных пассажей | Характеристика адаптированного материала | |
| Активность в РСК | Титр инфекционной активности (Ig ТЦД 50 /см 3) | |||
| СП | 20 | 3 | 1:2 | 6,5 |
| ПСГК-30 | 20 | 3 | 1:6 | 7 |
| IB-RS-2 | 24 | 4 | 1:4 | 6,33 |
| ВНК-21 | 18 | 9 | 1:12 | 7,5-8,25 |
| Таблица 5 | ||||||||||||
| Определение типа вируса в 33%-ной суспензии афтозного материала в РСК (экспертиза № 2045 «Киргизия/07») | ||||||||||||
| г/и сыворотки в рабочем разведении | Экспертиза № 2045 | Контроль | ||||||||||
| цельный | 1:2 | 1:4 | 1:8 | к/а | A/Турция/06 | О/Приморский/2000 | Азия-1 Амурский/2005 | Сат-1 | Сат-2 | Сат-3 | б/а | |
| А/Турция/06 | 4 | 4 | 3 | - | 4 | - | - | - | - | - | ||
| О/Приморский/2000 | - | - | - | - | - | 4 | - | - | - | - | - | |
| Азия-1 Амурский/2005 | - | - | - | - | - | - | 4 | - | - | - | - | |
| Сат-1 | - | - | - | - | - | - | - | 4 | - | - | - | |
| Сат-2 | - | - | - | - | - | - | - | - | 4 | - | - | |
| Сат-3 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 4 | - | |
| б/с | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| б/к | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | |
| Примечание: 4 - 100% задержка гемолиза; | ||||||||||||
| «-» - полный гемолиз; | ||||||||||||
| б/с - без сыворотки; | ||||||||||||
| б/а - без антигена; | ||||||||||||
| б/к - без комплемента | ||||||||||||
| Таблица 6 | |||||||
| Культивирование вируса ящура типа А штамма А № 2045/Киргизия/2007 в суспензии клеток ВНК-21 | |||||||
| № п/п | Доза заражения (ТЦД 50 /кл) | Титр вируса (Ig TLW 50 /CM 3) | ВСЕ (мкг/см 3) | ||||
| 1 | 2,2 | 0,1 | 18 | 2,0 | - | - | |
| 2 | 2,2 | 0,01 | 18 | - | 1,6 | - | - |
| 3 | 2,2 | 0,001 | 18 | - | 1,67 | - | - |
| 4 | 2,0 | 0,4 | 7 | 8,00 | 1,72 | 1,48 | 86,3 |
| 5 | 1,2 | 1,1 | 9,5 | 8,00 | 1,67 | 1,55 | 93,1 |
| 6 | 3,8 | 0,01 | 15 | 7,75 | 2,89 | 2,64 | 91,4 |
| Таблица 7 | |||||||
| Культивирование вируса ящура типа А штамма А (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП в суспензии клеток ВНК-21 | |||||||
| № п/п | Концентрация клеток (млн/см 3) | Доза заражения (ТЦД 50 /кл) | Длительность репродукции (часы) | ВСБ (мкг/см 3) | 146S+75S компоненты (мкг/см 3) | % выхода 146S+75S компонентов | |
| 1 | 2,5 | 1,5 | 14,0 | 8,25 | 2,93 | 1,72 | 58,7 |
| 2 | 2,5 | 1,2 | 15,0 | 8,50 | 3,12 | 1,80 | 57,7 |
| 3 | 3,0 | 1,2 | 17,0 | 8,00 | 2,06 | 1,33 | 64,6 |
| 4 | 2,6 | 1,1 | 15,5 | 8,25 | 2,71 | 1,83 | 67,5 |
| 5 | 2,3 | 1,0 | 16,5 | 7,50 | 2,38 | 1,27 | 53,4 |
| 6 | 2,8 | 1,0 | 14,5 | 7,75 | 2,27 | 1,49 | 65,6 |
| 7 | 2,7 | 0,6 | 16,0 | 7,50 | 2,06 | 1,34 | 65,0 |
| 8 | 3,1 | 0,05 | 18,0 | 7,75 | 2,31 | 1,19 | 51,5 |
| 9 | 3,5 | 0,001 | 20,0 | 7,25 | 2,54 | 1,76 | 69,3 |
| Таблица 8 | |||||||
| Культивирование вируса ящура типа А штамма А № 1707 «Армения-98-ДЕП» в суспензии клеток ВНК-21 | |||||||
| № п/п | Концентрация клеток (млн/см 3) | Доза заражения (ТЦД 50 /кл) | Длительность репродукции (часы) | Титр вируса (Ig ТЦД 50 /см 3) | ВСБ (мкг/см 3) | 146S+75S компоненты (мкг/см 3) | % выхода 146S+75S компонентов |
| 1 | 2,5 | 1,5 | 14,5 | 8,00 | 3,30 | 2,20 | 66,8 |
| 2 | 2,5 | 1,1 | 16,0 | 8,00 | 2,29 | 1,33 | 58,2 |
| 3 | 2,5 | 1,0 | 16,5 | 7,75 | 2,24 | 1,21 | 54,1 |
| 4 | 2,6 | 0,91 | 14,5 | 8,00 | 2,53 | 1,52 | 60,1 |
| 5 | 2,6 | 0,5 | 15,5 | 7,75 | 1,73 | 0,89 | 51,5 |
| Таблица 9 | |||||||
| Культивирование вируса ящура типа А штамма А22 № 550 в суспензии клеток ВНК-21 | |||||||
| № п/п | Концентрация клеток (млн/см 3) | Доза заражения (ТЦД 50 /кл) | Длительность репродукции (часы) | Титр вируса (Ig TЦД/cм 3) | ВСБ(мкг/см 3) | 146S+75S компоненты (мкг/см 3) | % выхода 146S+75S компонентов |
| 1 | 2,5 | 1,5 | 13 | 8,00 | 2,48 | 2,19 | 88,3 |
| 2 | 2,6 | 1,0 | 12 | 7,25 | 1,17 | 1,04 | 88,8 |
| 3 | 2,7 | 1,0 | 11 | 7,75 | 2,00 | 1,83 | 91,6 |
| 4 | 2,4 | 0,8 | 14 | 8,00 | 1,78 | 1,48 | 89,3 |
| 5 | 2,4 | 0,5 | 12 | 7,50 | 1,34 | 1,26 | 94,3 |
| 6 | 3,0 | 0,05 | 13 | 7,25 | 2,06 | 1,80 | 87,2 |
| Таблица 10 | ||||
| Сравнительные данные по устойчивости штамма вируса ящура А (Грузия) 1999/ № 1721 и штамма А № 2045/Киргизия/2007 к инактивации АЭЭИ и стерилизующей очистке ПГМГ | ||||
| Штамм | после культивирования | после инактивации и очистки | ||
| ВСБ м кг/мл | 146S+75S м кг/мл | ВСБ мкг/мл | 146S+75S мкг/мл | |
| А № 2045/Киргизия/2007 | 3,12 | 1,80 | 2,69 | 1,93 |
| А (Грузия) 1999/ № 1721 n=5 | 2,64±0,19 | 1,59±0,2 | 2,35±0,11 | 1,53±0,12 |
| +- | 0,48 | 0,21 | 0,34 | 0,4 |
| Таблица 11 | |||
| Оптимальный компонентный состав вакцины против ящура типа A инактивированной сорбированной | |||
| Ингредиенты | Количество (мкг/1 cм 3) | ||
| Минимум | Рекомендуемые | Максимум | |
| Авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S и 75S) компонентов вируса ящура типа А штамма А № 2045/Киргизия/2007 | 3,0 | 3,0 | >3,0 |
| ГОА | 11000,0 | 12000,0 | 15000,0 |
| Сапонин | 500,0 | 750,0 | 1500,0 |
| Поддерживающая среда | До 1000000,0 | До 1000000,0 | До 1000000,0 |
| Таблица 12 | |||||
| № п/п | Титр BHA log 2 против A № 2045/Киргизия/2007 на ДПВ | Наличие генерализации | |||
| 7 | 14 | 21 | 28 | ||
| 1 | 5,25 | 6,25 | 5,25 | 5,00 | - |
| 2 | 4,50 | 6,50 | 6,00 | 6,25 | - |
| 3 | 5,25 | 6,25 | 5,75 | 4,00 | + |
| 4 | 3,75 | 6,50 | 6,00 | 4,00 | - |
| M±m | 4,69±0,36 р<0,001 | 6,38±0,07 р<0,001 | 5,75±0,18 р<0,001 | 4,81±0,3 р<0,005 | 1/4 |
| Таблица 13 | ||||||||||
| Результаты исследования адсорбированной вакцины против ящура типа А из штамма А № 2045/Киргизия/2007 на быках | ||||||||||
| № п/п | Наличие генерализации | |||||||||
| 7 | 14 | 21 | 28 | 35 | 56 | 77 | 83 | 90 | ||
| 1 | 5,75 | 6,00 | 5,25 | 5,75 | 5,25 | 4,50 | 5,25 | 5,25 | 5,50 | + |
| 2 | 7,00 | 6,25 | 5,50 | 6,50 | 5,50 | 4,75 | 5,00 | 5,25 | 5,00 | + |
| 3 | 7,50 | 7,00 | 7,25 | 7,00 | 5,75 | 4,75 | 5,00 | 5,25 | 5,50 | - |
| 4 | 5,25 | 6,00 | 5,50 | 5,25 | 5,50 | 5,00 | 3,50 | 4,50 | 4,00 | + |
| 5 | 7,75 | 6,25 | 5,00 | 5,25 | 4,75 | 3,75 | 3,50 | 5,25 | 5,00 | + |
| M±m | 6,65±0,49 | 6,30±0,18 | 5,70±0,40 | 5,95±0,35 | 5,35±0,17 | 4,55±0,22 | 4,45±0,39 | 5,10±0,15 | 5,00±0,27 | 4/5 |
| р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | ||
| Таблица 14 | |||||
| Результаты исследования адсорбированной вакцины против ящура типа А из штамма А № 2045/Киргизия/2007 на телятах | |||||
| № п/п | Титр ВНА log 2 против А № 2045/Киргизия/2007 на ДПВ | Наличие генерализации | |||
| 7 | 14 | 21 | 28 | ||
| 1 | 7,00 | 6,00 | 6,50 | 6,50 | - |
| 2 | 7,75 | 6,00 | 6,00 | 7,25 | - |
| 3 | 6,75 | 6,00 | 5,00 | 6,50 | - |
| 4 | 7,50 | 6,75 | 4,5 | 3,75 | - |
| 5 | 8,00 | 6,25 | 6,00 | 7,00 | - |
| M±m | 7,4±0,23 р<0,001 | 6,20±0,15 р<0,001 | 5,60±0,37 р<0,001 | 6,20±0,63 р<0,005 | 0/5 |
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная, содержащая активное вещество и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером производственный штамм вируса ящура серотипа A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, в эффективном количестве.
2. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
3. Вакцина по п.2, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
4. Вакцина по п.3, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
5. Вакцина по п.4, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
6. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант-сорбент гидроокись алюминия (ГОА).
7. Вакцина по п.6, отличающаяся тем, что она содержит ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
8. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант сапонин.
9. Вакцина по п.8, отличающаяся тем, что она содержит адъювант сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
10. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит поддерживающую среду.
11. Вакцина по п.10, отличающаяся тем, что она содержит поддерживающую среду в количестве до 1000000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
12. Вакцина по любому из пп.1-11, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A, ГОА, сапонин и поддерживающую среду в соотношении, мкг.
Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь
УО "Витебская ордена " Знак Почета"
Государственная академия ветеринарной медицины
Кафедра эпизоотологии и инфекционных болезней животных
ящур сельскохозяйственное животное инфекционный
На тему: ЯЩУР
ВИТЕБСК 2010
План
1. Определение болезни.
Историческая справка.
Распространение болезни.
Экономический ущерб.
Этиология.
Эпизоотологические данные.
Патогенез.
Течение и симптомы.
Патологоанатомические изменения.
Диагностика.
Дифференциальная диагностика.
Лечение.
Мероприятия по профилактике и ликвидации болезни.
Ящур
(лат. - Aphtae epizooticae; англ. - Foot - and-Mouthdisease)
Определение болезни.
Ящур - высоко контагиозная, остро протекающая инфекционная болезнь парнокопытных сельскохозяйственных и диких животных, а также мозоленогих (верблюдов), характеризующаяся лихорадкой, развитием афтозных поражений на слизистой оболочке ротовой полости, коже конечностей в области венчика и мякишей, реже на вымени. В исключительных случаях ящуром заболевают другие виды животных, кроме парнокопытных. При несоблюдении мер личной профилактики ящуром заболевают люди, наиболее восприимчивы дети.
Историческая справка.
Официально считается, что первое упоминание о ящуре в литературе сделано итальянским ученым Д. Фракасторо в 1546 г. Он описал болезнь, которая поражала преимущественно крупный рогатый скот и сопровождалась признаками, характерными для ящура. Немецкие исследователи Д. Хеффлер и П. Фрош (1897) установили, что возбудителем ящура является вирус. Этим они открыли новую эру в микробиологии и положили начало ветеринарной и медицинской вирусологии. Множественность типов вируса ящура установили французские ученые А. Карре и А. Балле в 1922 г. Попытки специфической профилактики ящура у животных описаны в 1781 г. В Пруссии, согласно официальному постановлению Высшей санитарной коллегии, была проведена прививка против ящура крупного рогатого скота. Принцип ее заключался в заражении ящуром здоровых животных, которым в области спины вводили под кожу хлопчатобумажную нить, смоченную слюной больных животных. В России, в соответствии с инструкцией по прививкам скота против ящура (1909), рекомендовалось продергивать через ушную раковину нитку, смоченную слюной больных животных. Первую вакцину для специфической профилактики ящура у животных получили в 1934 г. Ф.И. Ганзен и В. Иенсен. Эпизоотии и панзоотии ящура многократно отмечались во многих странах мира, в том числе и на территории СССР. Все это диктовало необходимость разработки научно обоснованной системы мероприятий по борьбе с ящуром, сосредоточения усилий ветеринарной службы, ученых и практических специалистов по ликвидации и профилактике такой опасной болезни. С этой целью в 1958 г. был создан Всероссийский научно - исследовательский ящурный институт МСХ СССР, ныне федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ "). В 1995 г. МЭБ ФГУ "ВНИИЗЖ" присвоен международный статус "Региональной Референтной лаборатории МЭБ по ящуру для стран Восточной Европы, Центральной Азии и Закавказья". Указанная лаборатория осуществляет научное обеспечение мероприятий по профилактике ящура и в Республике Беларусь.
Распространение.
По данным МЭБ, ежегодно в мире 10-80 стран являются неблагополучными по ящуру. Сведения о заболеваемости животных ящуром в Республике Беларусь относятся к середине XIX в. С 1983 г. республика благополучна по ящуру.
Экономический ущерб.
Такой ущерб от ящура исчисляется миллиардами рублей в связи с его быстрым и широким распространением, снижением продуктивности взрослых животных, гибелью молодняка, большими затратами на карантинные мероприятия. Ящур представляет собой биологическую катастрофу, по экономическому ущербу в десятки раз превышающую ущерб от таких стихийных бедствий, как землетрясения, наводнения, ураганы и т.д. Например, ящур на Тайване в 1997 г., где возникло более 6 тыс. ящурных очагов, и было уничтожено свыше 4 млн свиней, нанес общий экономический ущерб около 10 млрд долларов США. От эпизоотии ящура типа О в Великобритании в 2001 г. экономический ущерб составил около 12 млрд долларов.
Этиология.
Вирус ящура РНК-содержащий, относится к семейству Picornaviridae роду Aphtovirus. В настоящее время известно 7 серологических типов вируса (А, О, С, САТ-1, САТ-2, САТ-3 и Азия-1). Каждый тип имеет определенное количество подтипов (вариантов): тип А имеет 46 вариантов, О - 14, С - 5, САТ-1 - 9, САТ-2 - 3, САТ-3 - 4, Азия-1 - 3 варианта. Преимущественное распространение имеют типы О, А, Азия-1 и САТ-2. Антигенная вариабельность возбудителя или, как еще ее называют, илюралитет (от лат. pluralis - множественность) при ящуре имеет огромное практическое значение, так как заражение одним типом или подтипом вируса и переболевание не создает иммунитета против другого типа вируса или даже его подтипа. При этом возможен переход одного типа вируса ящура в другой. Проблематичной в связи с этим остается изготовление вакцин против ящура, обеспечивающих иммунную защиту против большинства типов и подтипов вируса ящура. Вирус ящура можно поддерживать серийными пассажами на естественно восприимчивых животных или лабораторных животных (морские свинки, белые мышата-сосуны, крольчата и культура тканей). Наиболее чувствительны к вирусу культура клеток первичнотрипсинизированной почки коровы, овцы, свиньи и перевиваемой линии ВНК-21, на которой ЦПД проявляется через 6 ч и достигает максимума к 18-24 ч после заражения. Вирус также хорошо размножается в культуре клеток почек чувствительных животных, в культуре эксплантантов эпителия языка и рубца крупного рогатого скота и в некоторых перевиваемых линиях клеток ВНК-21, JBRS-2, JFFA-3, СПЭФ и др. Вирус ящура относительно устойчив к физическим и химическим фак-торам. Высокие температуры губительно действуют на вирус: при +100°С вирус погибает мгновенно; при + 64°С - в течение 3 с; при +49°С - за 1 ч; при +37°С - за 21 ч. Низкие температуры консервируют вирус: в замороженном мясе вирус может сохраняться до 200 дней; при - 70°С он сохраняется в течение не-скольких лет. Длительное время возбудитель сохраняется в мясных и молочных продуктах: в окорочках - в течение 112-119 дней; в лопаточном жире - 155-169 дней; в костном мозге - 169-179 дней; в жире окорока - 176-183; в беконе - 183-190; в охлажденном молоке - 14-40 дней. На шерстном покрове животных и одежде человека вирус сохраняется 40-145 дней. В навозной жиже сохраняется до 30 дней, а в сточных водах - до 103 дней. В стоге сена вирус сохраняется до 6 месяцев, в отрубях - до 140 дней, а в соломе - до 3 месяцев. Хорошее дезинфицирующее действие при ящуре оказывают 2-3% -е растворы гидроксида натрия и калия, а также формалина.
Эпизоотологические данные.
Восприимчивы к вирусу ящура около 100 видов парнокопытных. Наиболее восприимчив крупный рогатый скот с почти 100 % заболеваемостью. Высокая восприимчивость к вирусу ящура установлена также у свиней, затем у овец и коз. Восприимчивы в меньшей степени олени, буйволы, верблюды и яки. Из диких парнокопытных ящуром болеют лоси, сайгаки, косули, кабаны, жирафы, зубры, ламы и др., и им принадлежит очень важная роль в распространении ящура. Другие виды животных (собаки, кошки, крысы) заболевают исключительно редко. Вообще не восприимчивы лошади и птица. Восприимчивы животные всех возрастных групп, однако более восприимчивы молодняк, ожиревшие и упитанные животные, В лабораторных условиях вирусом ящура можно заразить морских свинок, мышей, кроликов. К ящуру восприимчив человек (дети). Источник возбудителя инфекции - больные ящуром животные и вирусоносители. Вирусоносительство у крупного рогатого скота может продолжаться от 240 до 400 дней. Продолжительное носительство у овец - до 330 дней. Вакцинация не прекращает вирусоносительство. Вирус выделяется во внешнюю среду со всеми экскретами и секретами (слюна, молоко, кал, моча). Особенно богата вирусом слюна. Важной с эпизоотологической точки зрения является тот факт, что вирус выделяется из организма животных еще в инкубационный период болезни. Факторами передачи являются контаминированные вирусом остатки корма, вода, подстилка, навоз, предметы ухода, транспорт и т.д. Переносить возбудителя на значительное расстояние могут невосприимчивые животные - собаки, кошки, лошади, домашняя и дикая птица и т.д. В распространении ящура особую роль играют продукты и сырье животного происхождения: молоко, мясо, кожа, шерсть и т.д., контаминированные вирусом ящура. Описаны так называемые "молочные эпизоотии", которые возникали в результате скармливания животным не обезвреженных молока и обрата. На десятки и даже сотни километров вирус ящура может распространяться с воздушными массами и аэрогенным способом заражать животных. Воротами инфекции являются слизистая оболочка ротовой полости, кожа в области венчика, межкопытной щели, вымени (безволосая часть кожи). Легче заражение происходит при нарушении их целостности. Болезни свойственна сезонность. Чаще ящур возникает в осенне-зимний период. Это связано с большей сохранностью вируса в холодное время года и с периодом наиболее интенсивной продажи, купли животных, сдачи их на мясокомбинат и т.д. Для ящура характерна в отдельных случаях стационарность, которая чаще всего обусловлена слабой эффективностью проводимых мероприятий по ликвидации болезни и носительством вируса переболевшими животными (чаще овцами). При ящуре отмечается 5-7-летняя периодичность, в основе которой лежит изменчивость вируса и повышение его вирулентности при условии, что специфическая профилактика в данной местности не проводилась. Длительное носительство вируса в организме животных (переболевших и вакцинированных), продолжительное сохранение его во внешней среде, широкий спектр восприимчивых домашних и диких животных (до 100 видов), множественность типов и подтипов вируса, которые не создают перекрестной защиты, - все эти факторы обеспечивают устойчивость возбудителя, сохранение его в природе и воспроизведение эпизоотического процесса. Ящур протекает в виде эпизоотий или панзоотий. Летальность у крупного рогатого скота 0,2-0,5 %, при злокачественном течении - до 50 %, иногда - до 100 %.
Патогенез.
В организм животного вирус попадает разными путями (аэрогенным, алиментарным, при непосредственном контакте). Как преимущественно дерматропный, он находит себе оптимальные условия для размножения в средних слоях эпителия слизистых оболочек или на безволосых участках эпидермиса. В этих местах вирус ящура размножается, вызывая образование так называемых первичных афт. Их обычно бывает одна-две. Содержимое афт содержит возбудителя в высокой концентрации, его инфекционный титр может достигать 10-10. Из первичных афт вирус лимфагенным путем попадает в кровь, что способствует транспортировке вируса к другим органам и тканям. Через 48 ч после заражения на фоне общей лихорадки на так называемых излюбленных местах - безволосых участках кожи (носовое зеркальце, ноздри, вымя), в ротовой полости, пищеводе, рубце и на коже в области копыт, а у свиней на пятачке и конечностях развиваются вторичные афты. При злокачественном ящуре вирус проникает в скелетную мускулатуру и сердце, там размножается, вызывая функциональные нарушения сердечной деятельности и тканевые дефекты. Иногда в патологический процесс вовлекается и ЦНС. Стадия генерализации продолжается 2-4 дня. Начиная с 4-го дня кровь снова становится свободной от вируса. Температура тела снижается, что связано с появлением антител. Оболочки первичных и вторичных афт разрываются спустя несколько часов после их появления, и на их месте образуются язвы, а затем эрозии. Образование афт на вымени способствует возникновению мастита, на коже венчика - хромоте. Если резистентность организма высокая, то процесс может остановиться на стадии первичных афт, что бывает крайне редко. При низкой резистентности организма вирус не задерживается на месте первичного проникновения, не образуется первичных афт, а заболевание носит септический характер. Это чаще бывает у молодняка, процент летальности у которого высокий.
Течение и симптомы.
Инкубационный период продолжается при ящуре от 2 до 7, а иногда до 14-21 дня. Зараженные животные в этот период уже выделяют вирус во внешнюю среду и представляют опасность для других животных. У крупного рогатого скота бывает доброкачественное и злокачественное течение ящура. При доброкачественном течении первичным признаком болезни является снижение аппетита. Затем появляется лихорадка, температура тела повышается до 40,5-41,5°С. Животные угнетены, отказываются от корма, пульс и дыхание учащены, удой резко снижается. В начальном периоде болезни слизистая оболочка рта сухая, горячая, наблюдается ее гиперемия (покраснение). На 2-3-й день после подъема температуры тела в ротовой полости на языке, на крыльях носа, а иногда и на носовом зеркальце появляются афты (пузырьки), наполненные вначале прозрачной, а затем мутной жидкостью. Затем стенки пузырька через 1-3 дня разрываются, содержащаяся в них лимфа смешивается со слюной и выделяется наружу. На месте лопнувших пузырей образуются болезненные эрозии с неровными краями, которые через 5-8 дней заживают. Температура тела с появлением афт быстро снижается. В период лихорадки и появления вторичных афт животные выделяют обильное количество слюны. Слюна тягучая, тянется до пола, животные своеобразно причмокивают. Афты образуются также на коже конечностей в области межкопытной щели и венчика, что сопровождается хромотой. При наличии хорошей подстилки заживление кожи на конечностях наступает через 7-12 дней, а при плохом уходе и содержании процесс осложняется и может сопровождаться нагноением и отслоением рогового башмака. У коров инфекционный процесс может сопровождаться, помимо указанного, поражением вымени. Кожа на сосках краснеет, набухает, появляются мелкие афты, которые затем сливаются, достигая величины лесного ореха. Образовавшиеся на сосках афты при доении лопаются и на их месте остаются болезненные эрозии, процесс может осложниться гнойным маститом. Молоко больных коров становится слизистым, горьковатым на вкус, легко свертывается и с трудом сбивается в масло. Снижение удоя у больных ящуром животных может достигать по стаду 50-75 %. Вследствие поражения ротовой полости, вымени И нижних конечностей нарушается прием корма, иногда наблюдаются поносы, хромота, снижается масса тела животных. Выздоровление наступает, как правило, через 3-4 недели. Аналогичные симптомы при ящуре отмечают у овец и коз, однако течение болезни у этого вида животных более доброкачественное. У свиней при ящуре поражаются конечности и пятачок, а у подсосных свиноматок - вымя. Заболевание конечностей сопровождается хромотой и нередко спадением копытец. Падеж поросят-сосунов от ящура может достигать 60-80 %. Иногда у крупного рогатого скота и свиней наблюдается тяжелое злокачественное течение ящура. Оно сопровождается резкой слабостью, угнетением, дрожью, учащением дыхания и пульса. Иногда у выздоровевших животных вдруг наступает резкое ухудшение состояния и внезапная смерть вследствие паралича сердца. Гибель животных может достигать 50-70 %, а иногда 100 %. Ящуром могут заболевать люди, особенно тяжело болеют дети. Заражение людей чаще всего происходит при попадании вируса с пищей (молоком). После 3-4-дневного инкубационного периода у человека появляются красные пятна, затем пузырьки, наполненные мутной жидкостью. Пузырьки лопаются и на месте их образуются изъязвления. Пузырьки также могут появляться на сгибательных поверхностях пальцев, на голени и предплечье. У взрослых людей течение болезни доброкачественное, у детей же тяжелое. У них появляется диарея, афтозные поражения в ротовой полости наблюдаются не всегда.
Патологоанатомические изменения.
Специфическими признаками при ящуре у крупного рогатого скота являются афтозные поражения слизистой оболочки ротовой полости, реже кожи межкопытной щели, венчика, молочной железы, носового зеркальца. Афты могут обнаруживаться на слизистой рубца, реже - ануса и влагалища и в виде исключения на коже туловища. У свиней афты в ротовой полости находят редко, чаще их регистрируют на коже пятачка, венчика и межкопытной щели. У мелких жвачных афты в ротовой полости могут быть небольших размеров. Достаточно часто у овец поражается кожа венчика, межкопытной щели и мякишей. Афты могут быть от булавочной головки до величины куриного яйца. Из других органов при ящуре чаще поражаются сычуг и кишечник. В них находят катаральное воспаление, принимающее часто геморрагический характер. В сычуге, кроме того, могут встречаться темно - коричневого цвета струпья и язвы. Обнаруживают в отдельных случаях кровоизлияния на эпи - и эндокарде, брюшине, слизистой оболочке сычуга и тонкого кишечника, катаральный мастит. При злокачественном течении афтозные поражения слабо выражены. Основные изменения находят в сердечной мышце и скелетной мускулатуре. Поражается чаще активная мускулатура: тазобедренная, плечевая, межреберная, мышцы языка и др. В сердце при внешнем осмотре отмечают множественные сероватые или серовато-желтоватые очажки различной величины и формы. Наличие их придает сердцу своеобразную полосатую окраску, напоминающую шкуру тигра (тигровое сердце).
Диагностика.
Базируется на основе учета особенностей болезни (почти 100 % заболеваемость животных, быстрое распространение, восприимчивость преимущественно парнокопытных, отсутствие сезонности и т.д.). Для этой болезни характерны клинические признаки. Окончательная диагностика болезни осуществляется на основании результатов лабораторных исследований. При их проведении обязательно следует определить тип и вариант вируса ящура, вызвавшего болезнь. Это важно для подбора соответствующих вакцин при проведении активной специфической профилактики. В лабораторию для исследования посылают стенки и содержимое афт (лимфу) на слизистой оболочке языка (крупный рогатый скот), на пятачке (свиньи), на коже венчика и межкопытной щели (крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, верблюды и другие восприимчивые к ящуру виды животных). При отсутствии афт для выделения вируса отбирают пробы крови в момент температурной реакции у животных, а также лимфатические узлы головы и заглоточного кольца, поджелудочную железу и мышцу сердца (трупы молодняка всех видов животных). Афты и лимфу отбирают в количестве не менее 5 г. Количество остальных материалов, предназначенных для выделения вируса и его последующей идентификации, должно быть не менее 10 г. Лабораторная диагностика предусматривает выделение вируса ящура из проб патологического материала с использование культур клеток и чувствительных лабораторных животных. Идентификацию вируса проводят в РСК, ИФА и ПЦР. Выявление антигена вируса ящура в суспензиях афтозного материала, мясопродуктов, культуры клеток проводят с помощью ИФА. Определение уровня специфических антител в сыворотке крови переболевших животных проводят с применением РН (микрометод) и ИФА, а идентификацию постинфекционных антител - в реакции ИФА. Диагноз на ящур считается окончательно установленным на основании лабораторных исследований в одном из следующих случаев: выделении вируса и его идентификации; обнаружении соответствующего антигена; обнаружении и идентификации постинфекционных антител. Диагностика должна обязательно предусматривать определение типа вируса ящура и его подтипа, вызвавшего заболевание у животных.
Дифференциальная диагностика.
Ящур у крупного рогатого скота следует дифференцировать от везикулярного стоматита, чумы, злокачественной катаральной горячки, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, оспы, некробактериоза, папулезного стоматита и блютанга, у свиней - от везикулярного стоматита, везикулярной болезни и везикулярной экзантемы, у овец - от везикулярного стоматита, чумы, инфекционной катаральной лихорадки.
Лечение.
За исключением стран, где ящур имеет значительное распространение, больных животных не лечат. Ветеринарно-санитарными правилами по профилактике и ликвидации ящура, действующими в Республике Беларусь, предусматривается уничтожение больных этой болезнью животных.
Специфическая профилактика.
Имеет ряд особенностей: иммунизация должна проводиться вакциной, содержащей строго соответствующий тип и подтип вируса ящура, выделенный в конкретном хозяйстве; вакцинация не прекращает вирусоносительство у животных, и они могут представлять опасность в плане распространения вируса ящура; вакцины могут обладать остаточной реактогенностью и вызывать осложнения в виде заболевания животных ящуром; вакцинация не обеспечивает 100 % защиту животных от ящура; в соответствии с требованиями МЭБ страна может быть признана свободной по ящуру при условии, что в этой стране вакцинации животных против этой болезни не проводится. В Республике Беларусь вакцинация животных против ящура не проводится с 1987 г. Для обеспечения России, а при необходимости и стран СНГ, в том числе и в Республике Беларусь, ФГУ "ВНИИЗЖ" выпускает следующие вакцины: сорбированные (ГОА - сапониновые) вакцины для иммунизации крупного рогатого скота яков, буйволов, верблюдов, овец и коз: моновалентные (О, А, С, Азия-1, САТ-1, САТ-2, САТ-3); би-, трех - и четырехвалентные (О, А, С, Азия-1); семивалентные и полиштаммные различной комбинации; эмульсионные вакцины для иммунизации свиней: моновалентные (О, А, С, Азия-1); бивалентные (О, А; О, Азия-1; А, Азия-1); трехвалентные (О, А, Азия-1); эмульсионные моновалентные вакцины для иммунизации свиней и КРС на основе множественной эмульсии (О, А, С, Азия-1); универсальные концентрированные вакцины моно - и поливалентные для ранней защиты животных, с формированием иммунитета в первые четыре дня после вакцинации (иммунитет продолжительностью один год и более).
Мероприятия по профилактике и ликвидации ящура.
Базируются на недопущении попадания вируса ящура в благополучные по этой болезни хозяйства или государства. Основными причинами распространения ящура на современном этапе являются: занос вируса из определенных неблагополучных по этой болезни стран, в первую очередь в связи с нелегальным завозом животных, продуктов животноводства и кормов; миграция людей (туризм, паломничества, стихийные бедствия, военные конфликты и т.д.), диких животных и птиц; возросшее движение автотранспорта, в том числе грузового и т.д. В связи с этим приоритетные мероприятия по профилактике ящура должны включать реализацию соответствующей государственной про-граммы, предусматривающей мониторинг за эпизоотической ситуацией и ее прогнозированием, контроль за перемещением животных и продуктов животного происхождения, осуществление мероприятий по предотвращению заноса вируса ящура на животноводческие фермы, соблюдение режима "предприятие закрытого типа", ежегодное проведение учений по быстрому реагированию при возникновении ящура и другие мероприятия, обеспечивающие благополучие отдельных ферм и государства в целом. В настоящее время в различных странах в зависимости от эпизоотической обстановки, географических условий, методов ведения животноводства, уровня развития и других факторов используют три основные системы мероприятий по профилактике и ликвидации ящура:
) профилактическая иммунизация не проводится, а в случае возникновения ящура - убой всех восприимчивых животных в очаге без проведения вакцинаций (stamping out - "чистый метод борьбы");
) профилактическая иммунизация не проводится, а в случае возникновения ящура проводится убой животных с осуществлением кольцевой вакцинации (вакцинация животных, находящихся на территориях вокруг эпизоотического очага);
) систематическая вакцинация животных в определенных зонах, а при возникновении ящура убой больных и кольцевая вакцинация. В основу профилактики и ликвидации ящура в республике положена вторая система мероприятий. При возникновении ящура хозяйство, ферма, отделение, комплекс объявляют неблагополучными и вводят карантин. По условиям карантина запрещают: ввоз (ввод) и вывоз (вывод) животных из карантинируемой фермы; перегруппировку скота, заготовку и вывоз продуктов животного происхождения; вход на ферму посторонним лицам; проведение выставок, ярмарок, торговли; вывоз молока и молочных продуктов в необезвреженном виде; проезд всем видам транспорта через неблагополучный пункт; выезд транспорта за пределы карантинируемой зоны. При организации мероприятий различают эпизоотический очаг, неблагополучный пункт и угрожаемую зону. Эпизоотический очаг - это помещение или ферма, отдельный двор, летний лагерь, где есть больные животные или хранятся продукты животноводства, полученные от больных или переболевших ящуром животных. В эпизоотическом очаге больных животных подвергают убою и уничтожению, клинически здоровых - вакцинируют. Другие мероприятия в ящурном очаге предусматривают: ограждение забором или рвом территории очага, организацию одного входа и кругло-суточного поста; выделение отдельного обслуживающего персонала для ухода за больными животными, обеспечение его спецодеждой; оборудование помещений для обеззараживания молока; ежедневная дезинфекция территории и помещений, в которых содержатся больные животные и предметов ухода за ними; дератизацию, отпугивание птиц, бродячих собак, кошек; сжигание трупов или зарывание их в траншеи на территории очага; навоз, остатки корма, подстилку подвергают биотермическому обеззараживанию или сжиганию на территории очага. Неблагополучным пунктом по ящуру считают населенный пункт по административному делению, на котором имеется эпизоотический очаг. Угрожаемая зона - это населенные пункты, граничащие с неблагополучным пунктом. Основными мероприятиями в неблагополучном пункте и угрожаемой зоне являются: вакцинация всех восприимчивых животных против ящура; строгий ветеринарно-санитарный надзор за заготовкой и вывозом скота, сырья фуража; соблюдение ветеринарно-санитарного пропускного режима; проведение просветительной работы и др. Карантин снимают через 21 день после последнего случая падежа или вынужденного убоя больного ящуром животного и проведения заключительной дезинфекции. Животных, переболевших ящуром, можно подвергать убою только на мясокомбинате через 3 месяца, а не болевших, но вакцинированных, - через 21 день после вакцинации.
Репетиторство
Нужна помощь по изучению какой-либы темы?
Наши специалисты проконсультируют или окажут репетиторские услуги по интересующей вас тематике.
Отправь заявку
с указанием темы прямо сейчас, чтобы узнать о возможности получения консультации.
ОПИСАНИЕ l75l84
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 05.1Х.1963 (№ 855589/30-15) Кл. 30h, 6 с присоединением заявки №
Государственный комитет по делам изобретений и открытий СССР
УДК 615.371.002 2 619 616
Б. Г. Петренко, Е. В. Андреев, И. Е. Толстяк, П. А. Конозенко, А. А. Омелаенко и М. Д. Бакуменко
Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии
Заявитель
ВАКЦИНА ПРОТИВ ЯЩУРА И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ
Подписная группа М 139
Известна вакцина против ящура; она содержит 6>/> вируссодержащей ткани, полученной из тушек крольчат. Вирус ящура этой вакцины инактивирован формалином; путем выдерживания его при 25 С в течение 24 — 48 «ас.
Описываемая вакцина также изготовляется из лапинизированного вируса, но она эффективнее известной. Отличие вакцины в том, что в нее введена тканевая масса, содержащая около 20% вируса.
Способ изготовления вакцины отличается тем, что измельченную тканевую массу из тушек крольчат, содержащую вирус ящура, смешивают с фосфатно-буферным раствором и стрептомицином. После этого ее помещают в условия пониженной плюсовой температуры на несколько часов. Затем добавляют в нее глицериновый раствор кристаллвиолета. Полученную смесь выдерживают примерно 168 «ас при +37 С и проверяют на стерильность, безвредность и активность.
Способ инактивации вируса не вызывает существенных структурных изменений вирусных частиц, что, в свою очередь, способствует получению вакцины, обладающей высокими иммуногенными свойствами, и позволяет свести к минимуму возможность сохранения в вакцине остаточной вирулентности.
Описываемая вакцина — 20%-иая тканевая взвесь сине-фиолетового цвета. Она предназначена для активной иммунизации крупного рогатого скота, овец и свиней в благополучных и угрожаемых по ящуру хозяйствах, а также здорового скота в неолагоприятиых по
5 ящуру пунктах — при условии строгой изоляции вакцинированных животных.
Вакцину применяют подкожно однократно в до"-ах, в зависимости от возврата: крупному рогатому скоту и свиньям 3 — 5 ил, взрослым
10 овцам 3 лгл. Иммунитет у вакцинировашгого скота наступает к двадцатому дню, у свиней— к тридцатому и сохраняется до 6 месяцев.
Срок годности вакцины 8 месяцев.
Предлагаемый способ осущестгляют сле15 дующим образом. Вирус ящура для изготовления вакцины получают от 2 — 4-дневных крольчат по общепринятой методике. Тканевую массу, содержащую вирус ящура, тонко измельчают, взвешивают и на каждые 10 л
20 вакцины берут 2 кг измельченной массы. К этой массе добавляют 2 л 6%-ного раствора алюминия, 3,5 л фосфатного буфера и 1 млн. ед. стрептомицина и смешивают. Полученную смесь выдерживают в течение 10 — 15 «ас при
25 +1 — 5 С при периодическом помешивании.
После этого в смесь вносят раствор криста l;Iвиолета в глицерине, приготовленньш в соотношении 1: 500, в количестве 2,5 л, и трижды смешивают по 20 л)ин с интервалом 30 агин.
30 Полученную смесь ииактивируют в течение
Предмет изобретения
Составитель А. Мусин
Редактор Б. Шнейдерман Техред Т. П. Курилко Корректор Г. П. Зимина
Заказ 8248г9 Тира>к 450 Формат бум. 60;к,90 /а Объем 0,13 изд. л. Цена 5 коп.
ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений и открытий СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2
168 час при +37 С в расфасованном, укупоренпом и осургученном виде или до расфасовки — в танкерах.
Готовую вакцину проверяют на стерильность (путем высева 1 — 2 ил вакцины в 100лл
МПБ и мясопеченочного бульона под вазелиновым маслом), на безвредность (путем введения пяти морским свинкам по 1 ил и пяти белым мышам по 0,2 лл вакцины), на авирулентность — на лабораторных и сельскохозяйственных животных, à»а активность — на крупном рогатом скоте.
Вакцина признается пригодной для практического применения, если у вакцинированных ею животных не развиваются генерализованные ящурные процессы после искусственного заражения их афтозным вирусом, разведенным в соотношении 1: 500.
1. Вакцина против ящура, изготовленная на основе вируса, получаемого от крольчат в виде измельченной тканевой массы, смешиваемой с фосфатно-буферным раствором и инактивированной химическими веществами, отличающаяся тем, что, с целью устранения вирулентности и усиления иммуногенных свойств
10 вакцины, в нее введена тканевая масса, содержащая около 20% вируса.
2. Способ изготовления вакцины по п. 1, отличаюи(ийся тем, что измельченную тканевую массу из тушек крольчат, содержащую вирус
15 ящура, смешивают с фосфатно-буферным раствором, гидрооксаном и стрептомицином, помещают на несколько часов в условия пониженной плюсовой температуры, добавляют в нее глицериновый раствор кристаллвиолета, полу20 ченную смесь выдерживают примерно 168 час при +37 С, проверяют на стерильность, безвредность и активность.
Острые инфекционные болезни могут наносить убытки не только большим фермам, но небольшим подворьям. Поэтому важно вовремя распознавать их симптомы и сразу приступать к лечению, тем более что многие из них опасны и для людей.
В данном обзоре рассмотрим, что такое ящур, в чем его опасность и как с ним бороться.
Этиология болезни
Возбудителем этого недуга является один из самых маленьких по размерам вирусов - Dermaphilus, содержащий РНК. Несмотря на маленький размер, обладает большой вирулентностью (способностью к заражению).
Ярко выражена дерматотропность - чаще всего заболевание начинается с заражения участков кожи или поврежденных слизистых оболочек у . Распространяется через сырое , мясо и продукты выделения.
Кроме употребления молока или непроваренного мяса в пищу, для человека опасен и контактный путь заражения - ветеринары знают, что, прикоснувшись к зараженному участку, есть риск «подцепить» такую болезнь. Это касается и частиц слизи. К счастью, человек не особо восприимчив к его действию, чего не скажешь о животных (особенно парнокопытных).
Сложность в том, что вирус неплохо переносит высушивание и замораживание и отлично сохраняется в и продуктах, которые получены от больных животных. Так, на шерсти он может продержаться 25–27 суток, а в молоке при +4 °С - от 10 до 12 дней. Если такой штамм попал на одежду, то этот срок будет еще большим - до 3,5 месяцев.
Вирус ящура довольно быстро (4–5 минут) гибнет при кипячении, не переносит солнечных лучей. Щелочные и формалиновые растворы тоже помогают в борьбе с ним.
Всего существует 8 штаммов этого вируса. В наших условиях основными являются типы А и О, другие возбудители проявляются редко.
Знаете ли вы? Последняя на данный момент крупная вспышка была зафиксирована в Великобритании. В 2001 году там насчитывалось около тысячи очагов болезни - эпизоотию вызвал штамм О, который нанес экономике ущерб в $20 млрд.
Первые симптомы
Инкубационный период вируса обычно составляет 2–4 дня, но часто он затягивается. К примеру, у свиней он может длиться 7–8 суток, а у - до 2–3 недель. В этот период видимых причин для беспокойства нет, хотя болезнь прогрессирует быстро.
Тревожными сигналами являются:
- общая слабость животного и потеря аппетита;
- кратковременное повышение температуры;
- длительный понос;
- животные начинают припадать на передние конечности, хромать (это характерно, если ящур затронул КРС);
- вялость жвачки;
- усиленное слюновыделение;
- в некоторых случаях животное не в состоянии открыть рот.
Течение болезни
Заболевание протекает в острой форме. У взрослых животных она обычно принимает доброкачественную форму, тогда как злокачественная (она же - атипичный ход) наблюдается крайне редко.
У разных животных действие инфекции протекает с учетом особенностей вида и породы.
Начнем с . По истечении скрытого срока (1–3 дня, но бывает и от 7 до 20 суток) животное вовсе отказывается от корма, пульс учащается, прекращается жвачка. На 2–3 сутки активной фазы внутри губ, на слизистой оболочке щек, языке и краях челюсти появляются афты (сыпные пузырьки).
В сложных случаях такие образования видны на вымени и между копытами. Поражение всех конечностей встречается редко, чаще это хромота на одну пару ног.
Важно! После того, как больное животное вывели из помещения, инвентарь и саму постройку нужно обработать дезраствором - 1%-й хлорамин достаточно силен.
Через 12–24 часов после появления афты разрываются, образуя эрозию. В это же время температура приходит в норму, хотя слюнотечение остается обильным, а по углам рта видна пена. «Язвочки» заживают за неделю, но при осложнениях этот процесс может занять 13–20 суток.
На конечностях можно увидеть те же афты и припухлости. Они также лопаются и заживают через 4–8 дней. Если поражение велико по размерам, то есть риск гнойных заболеваний, возможно даже отслоения роговицы.
Афты у дойных коров воспаляют сосковые каналы, больные четверти работают с нарушениями. Это проявляется в изменении состава молока: оно становится слизистым и горьким. Если сосковый канал перекрыт струпьями, то начинается . При этом продуктивность снижается до 60–75 %, а на ее восстановление уходят месяцы.
Особенно опасно такое заболевание, как ящур, для телят. Они не страдают от афтов, но болезнь сопровождается сильными сбоями желудочных путей. Если помощь опоздала - может начаться падеж.
«Чистый» тип вируса прекращает свою деятельность уже через 7–10 суток. При фоновых осложнениях болезнь длится гораздо дольше, вплоть до месяца. В основном это проблемы, связанные с желудочными и лактальными магистралями.
С атипичной формой еще сложнее: идущее на поправку животное резко «сдает», отказывается есть, у него парализуются задние конечности. Такой перепад может наступить через 6–10 дней после начала болезни. Это бьет по сердцу, и смертность, доходящая до 20–40 %, в таких случаях связана с его остановкой.
Знаете ли вы? Ящур давно досаждает животноводам: первое клиническое описание для животных еще в 1546 году дал врач Д. Фракастро. Аналогичную картину для людей описали гораздо позже немцы Фрош и Леффлер, доказавшие в 1897 году вирусную природу заболевания.
У эпидемия ящура проходит еще острее, не щадя молодняк. После 1–2 дней инкубации появляется лихорадка, падает аппетит. Конечности поражены, свиньи часто хромают (могут даже спадать их копытца). Афты видны на молочных железах, пятачках, а в ротовой полости наблюдаются редко. Тяжелый ход болезни сопровождается кровавыми поносами и слизью, кровоизлияниями в почках и легких.
Взрослые особи болеют долго: от недели до 20–25 суток. Для поросят ящур и вовсе смертелен (падеж составляет минимум 60 %), наиболее опасными считаются первые два дня активности вируса.
С козами немного легче. После 2–7 дней скрытого периода пропадает аппетит, животное лихорадит, оно начинает хромать. При этом ему трудно открыть рот, можно услышать скрежет зубов.
Афты появляются на копытах, нижней челюсти, губах и вымени.
Из них течет клейкая жидкость. Козы более стойки к ящуру, и осложнения возникают редко.
Полное выздоровление наступает через две недели.
Овцы после 2–3 дней латентного периода прихрамывают, временами прекращают жвачку и мало двигаются. Температура может дойти до 41–41,5 °С.
В случае с ними афты мелкие, быстро лопаются и рано заживают. Район поражения тот же: копытные щели и венчик, десна, язык и губы, верхняя челюсть до зубов.
Выздоравливают овцы спустя 10–12 суток. Ягнята часто гибнут из-за осложнений вроде септицемии (поражения тканей и кровеносной системы).
Важно! Больным перед едой дают 0,1 г анестезина, который немного сглаживает неприятные ощущения, возникающие при еде.
Но есть один нюанс: в больших отарах вирус действует замедленно и слабо, так что его действие не видно. Такой замедленный ход очень опасен и может длиться 3–4 месяца или до перехода в острую форму.
Лечение больных животных
Из-за многообразия проявлений вируса промышленность не выпускает универсальных (за исключением иммунолактона, и то не всегда он подходит). Поэтому лечение сводится к устранению симптомов.
Больное животное сразу же изолируют, подсыпают чистую подстилку и дают обильное питье - хватит и чистой воды. При этом воздух в помещении должен быть свежим, не спертым. Животным обеспечивают покой, стараются не перегонять без особой нужды (это дает лишнюю нагрузку на слабый организм, особенно на сердце).Пища - легкоусваиваемая: летом это трава, зимой дают мягкое сено или качественный силос.
Если ящур у животных проходит в обычной форме, лечебные меры сводятся к таким действиям:
- Ротовую полость полоскают слабыми растворами марганцовки (0,1 %) или фурацилина (0,5 %). Подходит и уксусная кислота в концентрации 2 %.
- При сильных поражениях слизистой оболочки рта берут мази на основе медного , анестезина или новокаина. Рыбий жир тоже пригодится.
Знаете ли вы? Вакцинация в ее нынешнем виде - во многом заслуга Луи Пастера. Его наследие и трудолюбие впечатляют: изготовив в 1881 году препараты против «сибирки», он уже через четыре года смог «нейтрализовать» бешенство при помощи вакцины.
- Ежедневно чистят конечности. Копыта и венчики обрабатывают составом из дегтя и рыбьего жира в равной пропорции. Чтобы закрепить результат, животное проводят через опилки, которые пропитаны дегтем. На больших фермах в тех же целях делают формалиновые ванны (5%-й раствор).
При тяжелых формах болезни делают следующие манипуляции:
- Сильно пораженные участки конечностей смазывают йодом. Расчистив копытце, убирают мертвую ткань и прижигают ранку порошком (по ½ перманганата и стрептоцида), после чего накладывают повязку.
- Афты на вымени обрабатывают новокаиново-трипофлавиновой мазью на основе вазелина. С ним же мешают и (15 % от объема). Помогает и синтомициновая мазь.
- Если осложнение проявляется в сепсисе, вводят внутривенно слабый новокаиновый раствор в 0,5 %. Берут 0,5 мл смеси на 1 кг веса.
- Используют и мучную болтушку, которую заливают через зонд ежедневно, по 15–20 л.
- Для укрепления сердечной мышцы готовят микстуру: в 400 мл дистиллированной воды добавляют 6 г бромкалия, 10 мл валериановой настойки и 15 мл ландыша. Это доза на один прием.
Профилактика
Ящур, как и любую вирусную болезнь, легче предупредить, чем лечить.
Главное место отводится вакцинации. Чаще всего вводят сапониновый состав в количестве 1 мл. Он начинает действовать через 10–14 дней, выходя на защитный пик максимум через месяц.
Иммунитет длится от 6 месяцев до года. КРС ревакцинируют раз в год, тогда как свиньям приходится делать по две прививки ежегодно.
Учитывают и возраст: у телят, например, «материнский» иммунитет очень силен и первые 3 недели может перебивать действие вакцины. У коз и ягнят он куда слабее, а поросята практически не защищены.
Остальные профилактические меры во многом традиционны:
- регулярная уборка помещения со сменой подстилочного ;
- размещение скота по нормам (никакой тесноты);
- периодический осмотр животного, особое внимание уделите ротовой полости, состоянию кожи, шерсти и копытным пластинкам;
- применение качественного корма, воды и добавок;
- ограничение контакта с уже зараженными животными (к примеру, не выводить на одно пастбище).
Опасен ли ящур для человека?
Как мы помним, такой вирус неохотно перебрасывается на людей, хотя его опасность не стоит преуменьшать.
К группе риска относят людей, которые работают непосредственно с животными: ветеринары, доярки, пастухи, работники боен и мясокомбинатов. Но и на подворье можно заразиться через контакт или употребление мяса и молока от больной «скотинки».
Ящур — опасная остро протекающая высококонтагиозная вирусная болезнь многих видов животных, характеризующаяся лихорадкой, слюнотечением, афтозно-эрозийными поражениями слизистой оболочки языка и ротовой полости, кожи носового зеркальца, конечностей, молочных желез, миокардитом и миозитом при высокой смертности молодняка первых дней жизни. Ящуром от животных может заразиться и человек.
Историческая справка. Впервые ящур описал и указал на его заразительность в Италии в 1546г. Д.Фракасторо. В 17 и 18 вв. ящур, который часто протекал злокачественно и его часто смешивали с чумой крупного рога того скота, был установлен во многих странах Европы. В России ящур известен с первой половины 19 века. В 1897 г. Леффлер и Фрош открыли возбудителя болезни — фильтрующий вирус.
В настоящее время ящур встречается во многих странах Европы, Азии, Африки и Южной Америки. Последняя вспышка ящура в России была зафиксирована в 2005году в Амурской области, Хабаровском и Приморском краях в результате заноса его через территорию Монголии из Китая, где была эпизоотия ящура типа Азия-1.
Экономический ущерб от ящура складывается из потерь в результате падежа главным образом молодняка (телят, поросят, ягнят), снижения на 50-75% молочной продуктивности коров, уменьшения живого веса больных животных и абортов. Особенно громадные потери несет проведение карантинных мероприятий. Так, ящур типа О на Тайване в 1997году, где было более 6 тысяч ящурных очагов и было уничтожено свыше 4млн. свиней, принес общий экономический ущерб около 10 млрд. долларов США. В Великобритании аналогичная эпизоотия ящура в 2001году, когда было зарегистрировано 2030 очагов ящура и уничтожено свыше 4млн голов животных, ущерб составил около 12 млрд. долларов. В России в 2005 году из-за ящурных очагов типа Азия-1 в Амурской области, Хабаровском и Приморском краях прямой экономический ущерб составил более 45 млн. рублей.
Возбудитель болезни вирус относится к семейству Пикорнавиридэ, роду Афтовирус. Вирусная частица состоит из рибонуклеиновой кислоты (РНК), окруженной периферической белковой капсидой, включающей 32 капсомера. В организме больного животного вирус в наибольшей концентрации находится в эпителии стенок афт и в лимфе в первые 24-48часов болезни. Его можно, но в значительно меньших концентрациях, обнаружить в слюне, в крови, моче и фекалиях. Причем вирус из афт становится заразительным уже в разведении 1:100-200млн., а из фекалий только в разведении 1:100. Известны 7 типов вируса: О,А,С, Азия-1, САТ-1, САТ-2, САТ-3 и множество их вариантов. Сейчас в мире имеют преимущественное распространение типы О,А, Азия-1 и САТ-2. Животные, переболевшие ящуром одного типа, могут повторно заболеть в случае заражения вирусом другого типа.
Вирус ящура сравнительно устойчив к воздействию факторов внешней среды. На поверхности предметов, загрязненных выделениями больных ящуром животных, вирус сохраняется 150, в навозе-до 168, в навозной жиже-до 40, в сточных водах-до 103дней. В крови рогатого скота и свиней (после быстрого замораживания мясных туш) вирус остается активным 40дней. В охлажденном молоке сохраняется до 47дней, в свежем молоке при температуре 37 градусов погибает через 12 часов, в то же время в кислом молоке и при приготовлении сыра вирус быстро погибает. Шерстный покров животных и одежда людей вирус сохраняет 28-40 дней. При правильно проведенном биотермическом обезвреживании навоза вирус погибает через 10-15 дней. Нагревание до 60 градусов убивает вирус через 15минут, а при 80-100 градусах он разрушается фактически моментально. Лучшим дезинфицирующим средством для уничтожения вируса ящура является использование 2-3%-ного горячего раствора едкого натрия и 1%-ного раствор формальдегида.
Эпизоотологические данные. Ящуром болеют все виды парнокопытных животных. Наиболее восприимчивы к ящуру крупный рогатый скот, затем по убывающей свиньи, овцы, козы и олени, менее чувствительны буйволы, верблюды. Описаны случаи заражения ящуром собак и кошек через молоко больных ящуром коров. Птица и лошади к ящуру не восприимчивы. Из лабораторных животных ящуром болеют морские свинки, кролики, мыши.
Ящуром болеют животные любого возраста, однако легче заражается и более тяжело переболевает молодняк в возрасте до 2-3месяцев.
Источником возбудителя инфекции являются инфицированные, больные животные, а также животные — реконвалесценты, которые длительное время могут быть вирусоносителями.
Основные пути распространения инфекции. Вирус ящура передается в основном алиментарным и аэрогенным путями. В хозяйства возбудитель ящура заносится при поступлении на ферму ЛПХ, КФХ больных или переболевших животных; при контактах с больными (переболевшими) животными, в том числе дикими; при пастьбе, водопое, перегонах; с инфицированными кормами, водой, а также при использовании молока от больных животных; при завозе продуктов убоя больных (переболевших) животных (использование в корм необезвреженных кухонных отходов); распространяется с ветром (мелкие частицы корма, пораженной ткани, слюны, пыли и т.п.), с инфицированными (загрязненными) предметами ухода; одеждой и обувью ухаживающего персонала, транспортными средствами.
Патогенез. Вирус, попадающий в организм животного через пищеварительный тракт или наружные покровы, через слизистые оболочки проникает в клетки эпителия, где происходит его фиксация и размножение. Размножение вируса вызывает ответную реакцию организма в виде серозного воспалительного процесса. Происходит образование одной или двух первичных афт, которые обычно владельцами животных не замечаются. Общее состояние животного в этой фазе болезни обычно не изменяется. Спустя 24 часа у большинства животных болезнь переходит во вторую фазу. Из мест первичной локализации вирус после размножения поступает в кровь, а затем во все органы и ткани. Генерализация процесса вызывает у животного острую лихорадочную реакцию.
Защитные средства, имеющиеся в организме животного, нейтрализуют вирус в крови в большинстве органов и тканей, но в связи с тем, что эпидермис относительно слабо снабжается кровью, а значит и антителами, вирус начинает в нем размножаться. В результате интенсивного размножения вируса в эпидермисе возникают множественные вторичные афты в ротовой полости, в области межкопытной щели и венчике конечностей, на коже сосков вымени (генерализованный процесс). Вирус ящура может размножаться в сердечной и скелетной мускулатуре.
Течение и симптомы болезни. У всех животных в естественных условиях ящур обычно протекает остро. У взрослых животных иногда наблюдается абортивное течение ящура, сопровождающееся кратковременным повышением температуры тела и быстро наступающим выздоровлением. У взрослых животных ящур обычно протекает доброкачественно. Принято различать типичную и атипичную формы (злокачественная, абортивная и латентная) ящура.
У крупного рогатого скота инкубационный (скрытый) период 1-3 дня, но может быть от 12 часов до 7 дней, доходя в отдельных случаях до 14-21 дня.
При доброкачественном течении сначала отмечаем уменьшение аппетита, вялость жвачки, увеличенное слюноотделение. Потом у больного животного наблюдается повышение температуры тела до 40,5-41,5 градусов, пульс учащается, состояние животного становится угнетенным, наблюдается отказ от корма и отсутствие жвачки. Ко второму и третьему дню болезни на внутренней поверхности верхней и нижней губы, на беззубом крае нижней челюсти, на языке и слизистой щек появляются афты . Практически одновременно у некоторых животных образуются афты в области межкопытной щели и на коже вымени. При ящуре часто происходит поражение всех четырех конечностей, но бывают случаи, когда поражаются только две передние или две задние.
В начале болезни афты бывают величиной с просяное зерно, потом они сливаются и увеличиваются до размеров горошины или грецкого ореха. Спустя 12-24 часа стенки у афт разрываются, оставляя после себя свежие эрозии . В этот момент температура тела у животного снижается до нормы. При осмотре больного животного отмечаем обильное слюнотечение, в углах рта образуется пенистая масса и характерное причмокивание. Образовавшиеся эрозии заживают через 6-8дней, но в том случае, когда процесс осложняется вторичной инфекцией, заживление эрозий затягивается до 2-3недель.
На конечностях ящурные поражения начинаются с того, что на коже венчика и мякишей, в области межкопытной щели, появляются болезненные и горячие припухлости, из-за которых у животного появляется хромота. Если происходит поражение всех конечностей, то такие животные лежат и его с большим трудом можно поднять. В дальнейшем на месте образовавшихся припухлостей появляются афты, которые вскоре лопаются с выходом наружу содержимого в афтах экссудата. При своевременном, правильно начатом лечении и содержании животных на сухой подстилке, эрозии заживают в течение 5-8дней. Если афтозные поражения имеют обширный характер, то у животного развивается флегмона венчика, глубокий гнойный пододерматит, гнойный артрит, вплоть до спадения рогового башмака.
У лактирующих коров часто наблюдается на коже вымени, сосках образование афт разнообразной величины. После вскрытия афт остаются эрозии. Воспалительный процесс имеет тенденцию распространятся на верхушку соска и на слизистую оболочку соскового канала. Все эти воспалительные процессы приводят к нарушению функции пораженной четверти вымени, что проявляется изменением состава молока, молоко становится слизистым, приобретает кислую реакцию и горьковатым на вкус. В результате закупорки соскового канала фибринозными, казеиновыми пробками и струпьями, приводящими к затруднению выхода молока, у коров развивается мастит. У лактирующих коров молочная продуктивность снижается до 75%. Молочная продуктивность, при своевременно и правильно начатом лечении восстанавливается у коров медленно, иногда на это уходит несколько месяцев. У отдельных взрослых животных отмечаем расстройство функции пищеварительного тракта, сопровождающееся поносом.
У телят до 2-месячного возраста ящурная инфекция обычно протекает в безафтозной форме, но с симптомами острого гастроэнтерита. Если своевременно не принять необходимые лечебные меры, заболевание закончится падежом телят. У отдельных телят в результате осложнения секундарной микрофлорой ящур осложняется бронхопневмонией.
При доброкачественном течении ящур продолжается в течение 8-10дней. Если к ящуру присоединяются осложнения, то болезнь растягивается на 25 и более дней.
Осложнения у больных ящуром животных возникают в результате присоединения к ящурному процессу возбудителей вторичных инфекций: стрептококков, стафилококков, в результате чего у больных животных появляются гнойные пододерматиты, флегмоны венчика, эндометриты, маститы, нефриты, бронхопневмония и т.д. Осложнения в основном развиваются у животных, имеющих слабую резистентность организма. Сам по себе вирус ящура может привести к развитию расстройств в деятельности сердечнососудистой системе на почве дистрофии миокарда и нарушения обмена веществ.
Бывают случаи, когда ящур может иметь злокачественное течение. При злокачественной форме ящура, когда болезнь вначале протекает с типичными для ящура признаками, на 8-12-й день (в стадии выздоровления) у животного внезапно наступает резкое ухудшение состояния животного. У животного отмечаем слабость, угнетение, пульс учащается до 120-140 ударов в минуту, животное отказывается от корма, прекращается жвачка. У отдельных животных отмечаем паралич задних конечностей. Смерть при злокачественной форме болезни наступает от остановки сердца.
В отдельных случаях злокачественное течение ящур приобретает с самого начала болезни, когда температура тела повышается на 0,5-1 градус, на фоне слабых афтозных поражений при одновременном поражении вымени. Заболевание протекает с потерей аппетита, резким угнетением и расстройством сердечной деятельности. Летальность при этом у животных составляет 20-50%.
Свиньи. У свиней инкубационный (скрытый) период чаще всего 24-48 часов, но иногда затягивается до 8 дней. Среди свиней заболевание протекает остро, с высокой смертностью молодняка. Болезнь характеризуется лихорадкой, угнетением и уменьшением аппетита. Поражаются у свиней в основном конечности, появляется хромота, у отдельных свиней отмечаем спадение копытец. Афты появляются на пятачке, молочных железах, изредка в ротовой полости. После разрыва афт остаются эрозии. У взрослых свиней заболевание длится 8-25 суток. У поросят ящур протекает в септической форме, приводя к падежу 60-100% животных уже в первые дни болезни. При тяжелом течении болезни происходят кровоизлияния в слизистых оболочках пищеварительного тракта, легких и почках, под серозными оболочками.
У овец инкубационный (скрытый) период длится 2-3дня. Болезнь протекает менее остро, чем у крупного рогатого скота. Редко отмечаем такой характерный для ящура признак, как слюнотечение. Афты мелкие, рано вскрываются и при отсутствии осложнений быстро заживают. В связи с поражением конечностей (афты в области межкопытной щели и венчика, а также пододерматитов) у овец возникает хромота. При массовом распространении ящура в отаре у части овец выявляем характерный симптомокомплекс: афтозно-эрозийные изменения на губах, языке, деснах, беззубом крае верхней челюсти, на конечностях и вымени, повышение температуры тела (до 41,5 град.), снижение аппетита, периодическое прекращение жвачки, угнетение. Нередко бывает, что ящур у овец в отарах протекает со слабыми признаками или эти признаки совсем отсутствуют, в результате ящур остается не диагностируемым. Овцы при таком развитии ящурной инфекции могут оставаться вирусоносителями в течении нескольких месяцев, выполняя роль скрытого источника вируса. У ягнят ящур чаще протекает в форме септицемии и сопровождается большим падежом.
У коз инкубационный (скрытый) период продолжается от 2 до 8дней. Протекает менее остро, чем у крупного рогатого скота. В первые дни болезни отмечаем лихорадку, угнетение, потерю аппетита, поражение ротовой полости и конечностей, которая приводит к хромоте. Рот у больных коз закрыт, отмечаем скрежет зубами. Обильное слюнотечение отсутствует. Часто происходит поражение вымени. Выздоровление обычно наступает в течение 10-14 дней. Козы являются более резистентными к ящуру, однако иногда и у них он протекает злокачественно.
У оленей при ящуре отмечаем понос, поражение слизистых оболочек ротовой полости и конечностей, которые часто осложняются некробактериозом. При отсутствии осложнений выздоровление оленей наступает через 10-12 дней.
Патологоанатомические изменения. Находим афты и эрозии в ротовой полости, иногда на слизистой оболочке пищевода и в преджелудках у жвачных. У поросят, ягнят и телят при вскрытии обнаруживаем геморрагическое воспаление кишечника, дегенеративные изменения в мышце сердца (тигровое сердце).
При злокачественной форме течения ящура в сердечной мышце находим тяжелые поражения. Сердечная мышца становится бледной и дряблой, на разрезе выступают серовато-красноватые пятна и казеозно перерожденные фокусы серо-белого цвета различной величины. Под эпикардом и эндокардом находим кровоизлияния. В печени, почках и скелетных мышцах — дегенеративные изменения.
Диагноз как при всех инфекционных заболеваниях ставится комплексно с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков болезни, патологоанатомических изменений и обязательных результатов лабораторных исследований.
Для лабораторного исследования направляют стенки и содержимое свежих афт (лимфу), пробы крови в момент лихорадки у животных, лимфатические узлы области головы, пищеводно-глоточная слизь и пробы сывороток крови (не ранее 14 суток после появления клинических признаков). Отобранные материалы помещают в закрытые стерильные флаконы, замораживают или транспортируют в консервирующей жидкости (равные объемы нейтрального глицерина и 0,8% раствора хлористого натрия) в термоемкостях со льдом (хладагентом) при строгом соблюдении мер предосторожности (безопасность работы с микроорганизмами 1-2 групп патогенности (опасности). Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3. 1285-03).
Материалы для исследования направляют с нарочным с сопроводительным письмом с подробным описанием эпизоотической ситуации в хозяйстве (населенном пункте).
Лабораторная диагностика ящура основывается на выделении и идентификации вируса ящура из проб патологического материала (стенок и содержимого афт, лимфы, лимфатических узлов, проб мяса, мясных продуктов и кормов), обнаружении антигена возбудителя и вирусной РНК, установлении первичной структуры гена ВР 1 вируса ящура и выявлении постинфекционных антител (исследования в РСК,ИФА, ПЦР, РМН, вирусвыделение).
Дифференциальный диагноз. При постановке диагноза на ящур ветспециалисты должны исключить кормовые стоматиты и , везикулярный стоматит кр.р.ск., . У овец и коз исключаем контагиозный пустулезный стоматит и .
Лечение. Учитывая, что успех лечения больных ящуром животных в большей степени зависит от строгого соблюдения правил кормления и содержания, больным животным с целью не перенапряжения сердца, обеспечиваем покой. Помещения для больных животных должны быть чистыми, с достаточным количеством подстилочного материала и иметь постоянный приток свежего воздуха. С целью борьбы с обезвоживанием организма больные животные должны в сельхозпредприятиях, ЛПХ, КФХ получать вволю чистую прохладную воду. В рационе кормления должны присутствовать мягкие удобоваримые корма (трава, мучная болтушка, зимой-хороший силос, мягкое сено). Ротовая полость промывается чистой водой с добавлением 2% уксусной кислоты, можно применять 0,1% раствор марганцовокислого калия,0,5%-раствор фурацилина. В случае сильного поражения слизистой рта применяем мазь (анестезин 2,5г; новокаин 2,5г; медный купорос 5г; рыбий жир 20г; вазелин 70г). Данная мазь ускоряет заживление эрозий и, обладая обезболивающим действием, позволяет животным принимать корм.
Конечности очищают от грязи и через каждые 1-2 дня смазывают копытца, венчик, кожу свода межкопытной щели дегтем пополам с рыбьим жиром. С этой же целью животных проводят через дезбарьеры с опилками, которые пропитываются дегтем, или через ванны с 5%-ным раствором формалина.
При тяжелом поражении конечностей (флегмоны мякиша, венчика, межпальцевой клетчатки) воспаленные участки смазывают настойкой йода. Копытца расчищаем, удаляем мертвые ткани, язвы и раны прижигаем порошком перманганата калия пополам со стрептоцидом и накладываем защитную повязку или применяем башмаки из брезента и другого плотного материала. В том случае, если ящур у животного осложняется сепсисом в результате вторичной инфекции, внутривенно вводим 0,5%-ный раствор новокаина из расчета 0,5 мл на 1кг веса животного. Применяется антибиотикотерапия, в т.ч. современными антибиотиками цефалоспоринового ряда. Для предупреждения у коров афтозного поражения вымени, доярки должны следить за чистотой рук, соблюдать правила доения коров. При афтозных поражениях на вымени применяют трипофлавино-новокаиновую мазь (трипофлавин 1г, новокаин 4г, вазелин 100г), синтомициновую эмульсию или 15% -ную прополисную мазь на вазелине.
При тяжелом течении ящура и нарушениях сердечной деятельности рекомендуется применение микстуры: настойка валерианы 10мл, настойка ландыша 15мл, бромистый калий 6г, вода дистиллированная 400мл; внутрь на один прием.
При злокачественных формах ящура больным коровам необходимо ежедневно вливать через зонд или с помощью бутылки 20-30 л мучной болтушки. Ослабленным животным неплохо давать мед по 100-200г или же поить обратом с добавлением 200-400г сахара.
Из специфических средств животным применяют цитрированную кровь реконвалесцентов или сыворотку из расчета 2мл на 1 кг веса. Эти средства эффективны, если их применять до генерализации процесса. С лечебной целью можно применять также противоящурный иммунолактон.
Иммунитет и специфическая профилактика. У впервые привитых животных иммунитет формируется к 21 дню. Вируснейтрализующие антитела в сыворотке крови появляются через 5-7 суток после инфицирования, достигая максимума через 3-4 недели и могут сохраняться около года. Коллостральные антитела у телят сохраняются 3-5 месяцев.
Для профилактической иммунизации животных применяют в зависимости от эпизоотической обстановки инактивированные моно- , би- и поливалентные вакцины по определенным схемам. Стабильный уровень поствакцинальных антител, обеспечивающих защиту взрослых животных от ящура, поддерживается в течение 6 месяцев.
Меры борьбы и профилактики. Благополучие по ящуру в РФ достигнуто благодаря реализации программы, включающей в себя слежение за эпизоотической ситуацией, контролем за перемещением животных и продуктов животного происхождения, проведения мероприятий по предотвращению заноса вируса ящура на животноводческие фермы, соблюдению режима «предприятий закрытого типа», проведение профилактической вакцинации животных в зонах высокой степени риска заноса и распространения болезни, ликвидацию больных или всех животных в очагах инфекции, строгое соблюдение системы карантинных мероприятий. При возникновении ящурного очага постановлением Губернатора области на хозяйство, населенный пункт накладывается карантин. Проводятся карантинно-ограничительные мероприятия в соответствии с инструкцией «О мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболевания животных ящуром», утвержденных Главным управлением ветеринарии МСХ СССР от 15марта 1985года.
Профилактическую вакцинацию животных осуществляют в угрожаемых зонах с последующим контролем иммунного фона. Специфическая профилактика ящура проводится с применением инактивированных вакцин производства ФГУ «ВНИИЗЖ» и ФГПУ «Щелковский биокомбинат».
Во Владимирской области в целях всевозможных ЧС по ящуру вокруг ФГУ «ВНИИЖЗ» создана 30-ти километровая буферная зона, в которую входят Собинский, Суздальский районы и г. Владимир, где проводится вакцинация всего поголовья кр.р.ск. и мелкого рогатого скота в т.ч. и находящихся в частном секторе. Ветспециалистами указанных районов осуществляется постоянный контроль за напряженностью иммунитета путем проведения мониторинговых исследований проб крови в ФГУ «ВНИИЗЖ».
