Средой обитания палочки туляремии является. Возбудитель туляремии. Характеристика его свойств. Резервуары в природе. Пути и способы заражения туляремией. Типы природных очагов. Варианты туляремийных бактерий и их отличия. Материал для исследования




"

Определение - зоонозная природно-очаговая бактериальная инфекционная болезнь с трансмиссивным механизмом передачи возбудителя. Характеризуется общей интоксикацией, лихорадкой поражением лимфатических узлов, дыхательных путей, наружных покровов (в зависимости от механизма передачи возбудителя).

Возбудитель - мелкая грамотрицательная неподвижная полиморфная палочка Francisella tularensis из семейства Brucellaceae рода Francisella. Содержит сомптический (О) и оболочечный (Vi) антигены; с последним связана вирулентность микроба. Антигенное родство с бруцеллами обуславливает перекрестные реакции. Различают 2 типа микроба: более патогенный тип А (биовар F.t.tularensis), существование которого в природе поддерживается благодаря циклу зайцы - клещи, и менее патогенный тип В (биовар F.t.palaearctica), циркулирующий в цепи грызуны - комары.

Факультативный анаэроб, для размножения требуется введение в питательную среду цистеина, кроличьей дефибринированной сыворотки и других стимуляторов роста. На плотных средах образует небольшие беловатые колонии.

Микроб малоустойчив к высоким температурам (при 60 ° С гибнет через 5-10 мин, при 100 ° С - в течение 1-2 мин), но при температуре 0-4 ° С в воде и почве сохраняется от 4 до 9 мес.; в зерне и фураже при 0 ° С выживает до 6 мес., при 8-12 ° С - до 2 мес., при 20-30 ° С - до 3 нед; в шкурах павших от туляремии грызунов при 8 ° С сохраняет жизнеспособность до 1 мес., при 30 ° С - до 1 нед. Микроб малоустойчив к высушиванию, ультрафиолетовым лучам, дезинфицирующим средствам: растворы лизола, хлорамина, хлорная известь убивают его за 3-5 мин.

Резервуар и источники возбудителя: многочисленные виды грызунов, насекомоядных, хищников, однако основными видами, обеспечивающими существование возбудителя в природе, являются обыкновенные полевки, водяные крысы, ондатра, зайцы, хомяки, от которых заражаются синантропные мышевидные грызуны. Резервуаром возбудителя являются также многие виды клещей (особенно иксодовые), комары, слепни. Больной человек эпидемиологической опасности не представляет.

Туляремия относится к природно-очаговым инфекционным болезням, т. е. возбудитель способен циркулировать в очаге среди животных без участия в цепи его передачи неопределенно долго. На территории бывшего СССР на основе особенностей ландшафтной приуроченности выделены следующие типы природных очагов туляремии: пойменно-болотный, луго-полевой, лесной, степной (балочный), предгорно-ручьевой, тугайный и тундровый. Каждый тип очага имеет собственные эпизоотолого -эпидемиологические особенности.

Период заразительности источника. Инфицированные грызуны сохраняют возбудителя в кровяном русле в течение стадии септицемии и вплоть до их гибели от этой инфекции, кровососущие насекомые - в течение 2 нед, клещи - пожизненно.

Механизм передачи возбудителя. Возбудитель туляремии передается человеку трансмиссивным, контактным, оральным и аспирационным механизмом. Трансмиссивный механизм реализуется через инфицированных клещей, комаров, слепней; контактный - в результате проникновения возбудителя через травмы кожи при укусе инфицированных грызунов, снятия с них шкуры, разделке тушек и т. п.; оральный - через контаминированную выделениями грызунов воду и пищу; аспирационный - воздушно-пылевым путем, т. е. при вдыхании контаминированной возбудителем пыли.

Естественная восприимчивость людей очень высокая. Перенесенное заболевание обычно формирует пожизненный иммунитет.

Основные эпидемиологические признаки. Туляремия распространена в Европе (Австрия, Россия, Франция, ФРГ, Швеция), Азии (Япония), Северной Америке. Рост заболеваемости людей наблюдается в годы повышения численности грызунов.отмечается спорадические случаи и эпидемические вспышки, для которых обычно характерно преобладание какого-либо одного из путей передачи возбудителя. Болеют преимущественно сельские жители, заражающиеся в бытовых (обычно при употреблении контаминированной возбудителем воды или продуктов) или производственных условиях (профессиональные заражения, т. е. при обмолоте загрязненных грызунами хлебов, переборке овощей, перевозке соломы, а также на охоте, рыбной ловле, где имеется риск трансмиссивного заражения). Известны и лабораторные заражения туляремией.

Инкубационный период от 1 дня до 3 нед, обычно 3-7 дней.

Основные клинические признаки: острое начало. Температура тела повышается до 38-39 ° С и дальнейшем имеет неправильный характер, сохранясь 2-3 нед. Появляются озноб, резкая головная боль, боли в мышцах, иногда тошнота и рвота. Лицо и конъюнктивы гиперемированы. Печень и селезенка увеличены. Клиническая форма заболевания во многом определяется путем передачи возбудителя, т. е. входными воротами его: трансмиссивное и контактное заражения сопровождаются развитием бубонной (увеличение различных лимфатических узлов) или язвенно-бубонной формы; водный и пищевой пути приводят к ангинозно-бубонной или кишечной (абдоминальной) форме; аспирационное заражение влечет за собой развитие легочной формы, с поражением бронхов или легких. Этот вариант отличается длительным и тяжелым течением. При массивном заражении, а также у ослабленных лиц возможна первично-септическая, или генерализованная, форма. Летальность не превышает 0,5 % и отмечается только при генерализованной, легочной и абдоминальной формах.

Лабораторная диагностика. Используют серологические реакции (РСК, ИФА, РА, РПГА) и кожно-аллергическую пробу. При постановке РА в качестве антигена используют взвесь туляремийных бактерий, убитых формалином. Диагностическим считается титр 1:100 и выше. РПГА обычно положительна со 2-й нед. Ответ на 3-5-й день от начала заболевания бывает положительным при использовании внутрикожной аллергической пробы. Проба специфична. Тулярин вводят внутрикожно по 0,1 мл в среднюю треть предплечья. Учет реакции проводят через 24-48 ч. Положительной она считается при наличии красноты и инфильтрата.

Для выделения возбудителя используют биологическую пробу на белых мышах. Этим методом исследуют органы животных, членистоногих, гидробионтов, воду, различные субстраты окружающей среды и материал от человека. Животные гибнут от туляремии на 3-4-е сутки, реже - позднее. От павших биопробных животных делают мазки-отпечатки из органов и посевы на желточную среду.

Диспансерное наблюдение за переболевшим проводится в течение 6-12 мес. в случаях наличия остаточных явлений после перенесенного заболевания. Осмотры проводятся врачом КИЗ и хирургом ежемесячно в течение первого полугодия и при необходимости - 1 раз в 2 мес. в последующем.

Туляремия - особо опасная инфекция. Заболевание входит в группу острых зоонозных инфекций, которые имеют природную очаговость. Возбудитель туляремии мелкая бактерией , устойчивая к низким температурам и высокой влажности.

В природе бактерии поражают зайцев, кроликов, водяных крыс, мышей полевок. При контакте с больным животным микробы передаются человеку. Источником инфекции могут стать зараженные пищевые продукты и вода. Возбудители могут попасть при вдыхании инфицированной пыли, которая образуется при обмолке хлеба и обработке зерновых продуктов. Инфекцию переносят слепни, клещи и комары.

Симптомы туляремии яркие. Болезнь протекает тяжело в виде бубонной, кишечной, легочной и септической форм. Чаще всего поражаются лимфоузлы подмышечных, паховых и бедренных областей.

Рис. 1. На фото места укусов грызунов при туляремии.

Возбудители туляремии высокочувствительны к антибиотикам группы аминогликозидов и тетрациклина. Нагноившиеся лимфоузлы вскрываются хирургическим путем.

Прививка от туляремии защищает от заболевания сроком на 5 — 7 лет. Мероприятия по эпидемическому надзору за заболеванием направлены на предупреждение заноса и распространение инфекции. Своевременно выявленные природные очаги заболевания среди животных и проведение дератизационных и дезинсекционных мероприятий предупреждают заболевания среди людей.

Туляремия является высокозаразным заболеванием. Она входит в перечень , подлежащих региональному (национальному) надзору.

Возбудитель туляремии

Свое название «Туляремия» заболевание получило в честь озера Туларе (Калифорния), где у сусликов было обнаружено заболевание, сходное по клинической картине с чумой. Бактерия названа в честь исследователя Е. Френсиса, который установил факт передачи заболевания человеку.

Является грамотрицательной палочкой (окрашивается по Граму в розовый цвет), а значит, бактерия имеет капсулу. Возбудитель туляремии является аеробом. Спор не образует.

Рис. 2. На фото бактерии Francisella tularensis под микроскопом (слева, окраска по Граму) и компьютерная визуализация возбудителей (справа). Возбудитель туляремии имеет форму коккобациллы, но может иметь вид нитей.

Бактерии туляремии обладают следующими способностями, определяющими их патогенность:

  • адгезия (слипание с клетками);
  • инвазия (проникновение в ткани);
  • внутриклеточное размножение в фагоцитах с последующим подавлением их киллерного эффекта;
  • наличие у бактерий рецепторов к Fс-фрагментам IgG (иммуноглобулинов класса G), что приводит к нарушению активности системы комплемента;
  • при разрушении микробов выделяются эндотоксины . Именно они играют ведущую роль в патогенезе заболевания и обуславливают его клинические проявления;
  • токсины и компоненты микробной клетки обладают сильными аллергизирующими свойствами, что способствует еще большему повреждению тканей.

Антигенная структура бактерий

У вирулентных форм бактерий туляремии обнаружены антигены O и Vi.

  • Vi-антиген (оболочечный). От него зависит вирулентность бактерий и иммуногенность.
  • O-антиген (соматический). У бактерий туляремии соматический антиген представляет эндотоксин.

Устойчивость бактерий во внешней среде

Возбудители туляремии проявляют высокую устойчивость во внешней среде:

  • до 4-х месяцев сохраняют жизнеспособность в воде и влажной почве при температуре 4°С, до 2-х месяцев — при температуре 20 — 30°С;
  • в соломе и зерновых культурах бактерии сохраняются до 6 месяцев при температуре 0°С;
  • до 20-и дней бактерии сохраняются в шкурах убитых животных, до 120 дней — в их экскрементах;
  • до 6 месяцев бактерии сохраняются в замороженном мясе, до 8 суток — в молоке.

При кипячении бактерии погибают мгновенно, под воздействием солнечных лучей погибают через 30 минут. Растворы сулемы, хлорамина и 50% спирта губительно действуют на бактерии.

Рис. 3. На фото колонии возбудителей туляремии.

При росте на твердых питательных средах они имеют белый цвет с голубоватым оттенком.

Эпидемиология туляремии

В РФ ежегодно регистрируется 50 — 380 случаев заболеваний туляремией человека. В основном это небольшие или единичные вспышки заболевания в летнее-осенний периоды, причиной которых являются нападения клещей, обработка тушек ондатр и зайцев, употребление инфицированной пищи и воды. Механизация сельского хозяйства свела к минимуму случаи массового накопления мелких грызунов и мышей на сельхоз полях. Лица, имеющие дачи и садовые участки, охотники и рыбаки, геологи и сельскохозяйственные работники находятся в группе риска.

Места активного размножения грызунов являются особо опасными в отношении заболевания туляремией.

Рис. 4. На фото носители возбудителей туляремии.

Резервуар инфекции

  • В природе РФ бактерии туляремии чаще всего поражают зайцев, кроликов, хомяков, водяных крыс и мышей полевок. Заболевание у них протекает бурно и всегда заканчивается смертью. Болеют туляремией так же черные крысы, суслики и хорьки. Второе место по заболеванию туляремией занимает крупный рогатый скот, свиньи и овцы.
  • Источником инфекции могут стать инфицированные пищевые продукты.
  • Источником инфекции может стать вода. Загрязняют воду мыши полевки, живущие вдоль берегов рек, озер и прудов. Источником инфекции может стать вода из случайных заброшенных колодцев. Возбудители туляремии водоемы делают долгосрочными резервуарами инфекции.
  • Зараженные частицы пыли, которые образуются при обмолоте зерна, пыль из соломы и комбикорма так же могут стать источником возбудителей туляремии. При этом чаще всего поражаются органы дыхания.

Больной человек опасности для окружающих не представляет.

Переносчики туляремии

Переносят инфекцию комары, слепни и иксодовые и гамазовые клещи.

Рис. 5. На фото самец иксодового таежного клеща (Ixodes persulcatus) слева и гамазовый клещ справа.

Пути передачи инфекции

  • Контактный (предполагает контакт с больными животными и их биологическим материалом).
  • Алиментарный (употребление зараженной пищи и воды).
  • Трансмиссивный (укусы инфицированных кровососущих).
  • Аэрогенный (вдыхание инфицированной пыли).

Рис. 6. Контакт со шкурками убитых инфицированных животных и укусы кровососущих — основные пути передачи инфекции.

Механизм передачи инфекции

Туляремии присущи множественные пути передачи инфекции:

  • через поврежденные кожные покровы,
  • через слизистую оболочку ротоглотки и миндалин,
  • через слизистую оболочку глаз,
  • через дыхательные пути,
  • через пищеварительный тракт.

Для заражения туляремией достаточно одной микробной клетки.

Как развивается туляремия (патогенез заболевания)

  • Кожа, слизистые оболочки, верхние дыхательные пути и желудочно-кишечный тракт являются входными воротами для инфекции. Этот факт является определяющим при развитии клинической формы туляремии: язвенно-бубонной, бубонной, глазобубонной, ангинозно-бубонной, легочной, абдоминальной или генерализованной.
  • В период инкубации в области входных ворот возбудители туляремии фиксируются и размножаются. Как только количество бактерий достигает определенного количества, начинается период клинических проявлений.
  • По окончании периода инкубации, бактерии по лимфатическим путям проникают в регионарные лимфатические узлы, где они усиленно размножаются. Так образуются первичные бубоны.
  • Гибель бактерий сопровождается выбросом эндотоксина, что усиливает локальное воспаление, а попадание эндотоксинов в кровь вызывает интоксикацию.
  • Внутриклеточное размножение бактерий в фагоцитах с последующим подавлением их киллерного эффекта приводит к формированию гранулем в первичных бубонах, что приводит к их нагноению. Первичные бубоны заживают длительно. Нагноившиеся лимфоузлы вскрываются хирургическим путем.
  • Генерализованная инфекция протекает с выраженным токсикозом и аллергическими реакциями, возникновением вторичных бубонов, поражением разных органов: легких, печени и селезенки. Вторичные бубоны не нагнаиваются.

Естественная восприимчивость человека к заболеванию достигает 100%.

Рис. 7. На фото язва на месте укуса при туляремии.

Признаки и симптомы туляремии

Инкубационный период

Инкубационный период при туляремии в среднем длится неделю. Иногда затягивается до одного месяца. В период инкубации в области входных ворот возбудители фиксируются и размножаются. Как только количество бактерий достигает определенного количества, начинается период клинических проявлений.

Симптомы туляремии в начальный период клинических проявлений

Интоксикационный синдром

Температура тела в начальный период клинических проявлений повышается до 39 — 40° С, появляется головная и мышечная боли, развивается слабость, пропадает аппетит, развивается брадикардия, падает артериальное давление.

Местные изменения

В местах внедрения инфекции развивается воспалительно-некротическая реакция. На кожных покровах развивается язва, которая в своем развитии проходит стадию папулы, везикулы и пустулы. При оседании бактерий в области миндалин развивается некротическая ангина. При попадании бактерий в легкие развивается некротическая пневмония. При попадании бактерий на слизистую оболочку глаз развивается конъюнктивит.

Рис. 8. На фото увеличенный лимфатический узел при туляремии.

Симптомы туляремии в период клинических проявлений

Период разгара заболевания характеризуется длительным (до 1-го месяца) лихорадочным периодом и проявлением одной из клинических форм заболевания (в зависимости от входных ворот): язвенно-бубонной, бубонной, глазобубонной, ангинозно-бубонной, легочной, абдоминальной или генерализованной.

Внешний вид больного имеет характерные черты: лицо одутловатое и гиперемированное, иногда с синюшным оттенком, склеры инъецированные, На слизистой оболочке ротоглотки появляются точечные кровоизлияния. Увеличиваются лимфоузлы.

Признаки и симптомы туляремии при бубонной форме заболевания

Лимфоузел появляется на 3-й день клинических проявлений заболевания и достигает максимального размера к концу первой недели заболевания. Его локализация зависит от места входных ворот.

Первичный лимфоузел при туляремии большой — от размеров грецкого ореха до 10 см в диаметре. Чаще всего увеличиваются бедренные, паховые, локтевые и подмышечные лимфоузлы. Ярко выражены явления периаденита. Кожа на лимфатическим узлом краснеет. Сам узел становится болезненным при пальпации.

Лимфоузел либо рассасывается, либо нагнаивается. Нагноившийся лимфоузел заживает длительно. На его месте образуется рубец.

Рис. 9. На фото бубонная форма туляремии.

Признаки и симптомы туляремии при язвенно-бубонной форме заболевания

При трансмиссивном и контактно-бытовом механизме передачи инфекции кроме бубона развивается первичный аффект. Поражение кожных покровов начинается с появления гиперемии (пятна), кожа над которым быстро уплотняется (папула). Далее на месте папулы появляется пустула, при вскрытии которой обнажается безболезненная язва до 7 мм в диаметре. Края язвы подрыты. Отделяемое скудное. Заживление происходит рубцом через 2 — 3 недели. Обычно язвы появляются на открытых частях тела — шее, предплечье и голени.

Рис. 10. На фото язва при туляремии.

Признаки и симптомы туляремии при глазо-бубонной форме заболевания

При попадании возбудителей на слизистую оболочку глаз развивается конъюнктивит. Бактерии в глаза проникают с пылью и грязными руками. Конъюнктивит чаще всего развивается с одной стороны. Больного беспокоит сильное слезотечение. Веки отекают. Отмечается гноетечение. На слизистой оболочке нижнего века появляются желтовато-белые узелки. Роговица поражается редко. Заболевание протекает длительно и является весьма серьезным. Лимфатические узлы чаще всего увеличиваются в заушной области, переднешейные и подчелюстные.

Рис. 11. На фото конъюнктивит при туляремии.

Признаки и симптомы туляремии при ангинозно-бубонной форме заболевания

При попадании возбудителей на слизистую оболочку ротоглотки развивается ангина. Бактерии проникают в ротоглотку с инфицированной пищей или водой. В дальнейшем может развиться абдоминальная форма заболевания. Миндалины быстро приобретают синюшный оттенок. Развивается отек миндалин, язычка и небных дуг.

На их поверхности образуется налет сероватого цвета. Пленка, как и при дифтерии, снимается с трудом, но никогда, в отличие от дифтерии, за пределы органа не выходит. Под пленкой образуются язвы, которые заживают длительно. Бубоны часто развиваются на стороне миндалин — подчелюстные, шейные и околоушные.

Рис. 12. На фото ангина при туляремии.

Признаки и симптомы туляремии при абдоминальной форме заболевания

Желудочно-кишечная форма туляремии встречается редко, но по выраженности клинических проявлений является самой тяжелой. Больного беспокоят сильные боли в животе, тошнота, рвота и отсутствие аппетита. Стул часто жидкий, но могут быть и запоры. Увеличиваются брыжеечные лимфоузлы.

Признаки и симптомы туляремии при легочной форме заболевания

При попадании возбудителей в дыхательные пути развивается бронхит или пневмония. При бронхите больного беспокоит сильный сухой кашель, при пневмонии — высокая изнуряющая температура тела. При бронхите прослушиваются сухие хрипы. Через 2 недели наступает выздоровление. При поражении легочной ткани развивается очаговая пневмония, проявляющая склонность к осложнениям в виде бронхоэктазов, абсцесса, гангрены и плеврита. В процесс вовлекаются бронхопульмональные, паратрахеальные и лимфоузлы средостения.

Признаки и симптомы туляремии при генерализованной форме заболевания

Генерализованная форма заболевания протекает по типу сепсиса. Больного беспокоит длительная высокая температура. Симптомы интоксикации резко выражены. Увеличивается печень и селезенка. На симметричных участках тела появляется сыпь. Бактерии, распространяясь с кровью, становятся причиной развития вторичных бубонов.

Туляремия протекает от 2-х до 4-х недель и почти всегда заканчивается выздоровлением. После перенесенного заболевания у человека формируется пожизненный прочный иммунитет.

Диагностика туляремии

При диагностике туляремии используют следующие методы:

  • аллергологический,
  • серологический,
  • биологический.

Аллергологический метод

Аллергологический метод является строго специфичным и самым ранним среди всех методов диагностики туляремии. Тулярин представляет собой взвесь убитых бактерий туляремии в изотоническом растворе хлорида натрия с глицерином. Кожная аллергическая проба проводится с 3-го дня заболевания. Тулярин вводится внутрикожно в среднюю треть предплечья. Инфильтрат измеряется через сутки, двое и трое. При диаметре инфильтрата 0,5 см проба считается положительной. При исчезновении покраснения к концу первых суток проба считается отрицательной.

Рис. 13. Аллергическая проба с тулярином (аллергеном) является диагностическим методом выявления сенсибилизации организма.

Проба с тулярином является строго специфичной. Единожды возникшая положительная реакция сохраняется годами.

Серологические методы

Реакция агглютинации (РА) при туляремии дает положительный результат со 2-й недели заболевания. Титр антител с 1:100 и увеличение титра антител (РПГА) через 7 — 10 дней подтверждают диагноз.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет определять наличие иммуноглобулинов класса G и M. Анализ является высокочувствительным. Применяется с 6-х суток заболевания. Наличие IgM говорит об остроте заболевания, IgG — о более поздних сроках заболевания и указывает на наличие хорошего иммунного ответа у больного.

Бактериологическая диагностика туляремии

Бактериологическая диагностика туляремии не всегда дает положительный результат из-за сложности выделения возбудителей туляремии из биологического материала больного.

не растет при посевах на обычных питательных средах. Чистая культура получается при заражении животного с последующими посевами возбудителей из биологического материала животного на питательные среды. Этот процесс проводится только в специализированных режимных лабораториях, так как туляремия является особо опасной инфекцией.

Рис. 14. Колонии Francisella tularensis после посева появляются через несколько дней. Они имеют белый цвет с голубоватым оттенком.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция является генетическим методом диагностики туляремии. Информацию о наличии возбудителей можно получить уже в лихорадочном периоде.

Статьи раздела "Особо опасные инфекции" Самое популярное

Туляремия - зоонозная острая инфекция с природной очаговостью. Характеристика возбудителя. Возбудитель был открыт в 1911г. Мак-Коем и Чепином в Калифорнии во время зем­летрясения около озера Туляре, откуда грызуны стали уходить в места обитания человека и
среди людей возникло заболевание, получившее название туляремия. Изучил возбудителя Френсис. Возбудитель получил название Francisella tularensis, относится к отделу Gracilicutes, роду Francisella.

Морфология: мелкие палочки или кокки, иногда в виде гантелей (полиморфны), не имеют спор и жгутиков; могут образовывать капсулу. Тинкториальные свойства: грам"-", в мазках- отпечатках из органов, окрашенных по Романовскому - Гимзе, имеют нежно-фиолетовый цвет. Культуральные свойства: факультативные анаэробы, не растут на простых средах, а только в средах с добавлением желтка или цистина. На твердых питательных средах обра­зуют беловатые блестящие колонии с ровным краем; на жидких средах - поверхностный рост. Биохимические свойства: малоактивны, расщепляют углеводы до кислоты; фермен­тируют глицерин, иногда образуют сероводород. Антигенная структура: содержат оболочечный Vi- и соматический О-антигены. Vi -антиген обусловливает вирулентные свойства. Факторы патогенности: вирулентные свойства обусловлены Vi- антигеном и токсическими веществами типа эндотоксина. Резистентность: возбудитель туляремии хорошо сохраняется во внешней среде, осо­бенно при низкой температуре. Эпидемиология заболевания. Источником этой болезни являются грызуны, чаше водяная полевка, ондатра, домо­вая мышь, зайцы. Пути передачи: трансмиссивный (основной путь передачи) - через укусы насекомых, клещей, комаров, реже блох; контактно-бытовой - через поврежденную кожу или слизистую оболочку глаз; пищевой - при употреблении зараженной воды или пищевых продуктов; воздушно-пылевой - при вдыхании с воздухом пыли или капелек, загрязненных выделениями грызунов. Заболевание от человека к человеку не передается. Чаще болеют сельские жители и люди определенных профессий, постоянно контактирующие с зараженными животными.

Патогенез и клиника заболевания. Входные ворота: поврежденная кожа и слизистые оболочки дыхательных путей и пищеварительного тракта. Попав в организм, возбудитель по лимфатическим сосудам рас­пространяется по организму. Токсины возбудителя поражают лимфоузлы, в результате чего происходит образование бубонов. В зависимости от пути проникновения различают бубон­ную форму, кожно-бубонную, язвенно-бубонную, глазную, кишечную, легочную и септиче­скую формы туляремии. Инкубационный период составляет 3-7 дней. В результате воспаления лимфоузлов, они увеличиваются в размерах (от лесного ореха до куриного яйца). Бубоны часто нагнаива­ются и долго на заживают. При генерализованной форме, когда возбудитель проникает в кровь, наблюдается высокая температура (38-40°С), озноб, мышечные боли в области спины, ног, поражение селезенки, печени, дыхательных путей, пищеварительного тракта. По тяже­сти различают легкую, средней тяжести и тяжелую формы туляремии, по длительности -острую и затяжную формы. В среднем заболевание длится 16-30 дней и, как правило, закан­чивается выздоровлением. При заболевании развивается аллергизация к антигенам возбуди­теля. Иммунитет. После заболевания остается прочный иммунитет. Лабораторная диагностика. Исследуемый материал: смывы, кровь, содержимое бубонов. Методы диагностики: кожно-аллергическая проба с тулярином; серологический метод с туляремийным диагностикумом;


Данные 2 метода используются чаще всего: бактериологический - выделение чистой культуры (проводится только в спе­циальных лабораториях): для этого исследуемым материалом заражают внутрибрюшинно морских свинок (непосредственно от больного выделить чистую культуру не удается), кото­рые погибают через 5-7 дней, их вскрывают, делают из органов мазки-отпечатки (бактериоскопический метод), а материал засевают на свернутую желточную среду; биопроба - заражение патологическим материалом белых мышей или морских свинок; морские свинки погибают на 4-6-ой день. Для обнаружения возбудителя у павших животных (в трупном материале) при­меняют микроскопию мазков-отпечатков из органов, выделение чистой культуры, био­пробу, а также реакцию термокольцепреципитации с предварительно прокипяченной взвесью из печени или селезенки животных.

Лечение. Применяют аминогликозиды - стрептомицин, канамицин, а также левомицетин, эрит­ромицин. Возбудитель не чувствителен к пенициллину и сульфаниламидам.

Профилактика.

Общая профилактика - борьба с грызунами, защита водоисточников, санитарно-просветительная работа, охрана складов с пищевыми продуктами от мышей, грызунов.

Специфическая профилактика - по эпидемическим показаниям применяют живую вакцину (штамм N15), полученную Гайским и Эльбертом. Иммунитет сохраняется 5-6 лет.

Это очень маленькие (см. цв. вкл., рис. 96.2), размерами 0,2-0,7 мкм кокковидные или эллипсоидные полиморфные палочки, которые очень часто при специальных методах окрашивания дают биполярную окраску; йеподвижны, грамотрицательны, спор не образуют; каталазонегативны, образуют HjS, строгие аэробы, температурный оптимум для роста 37 °С. рН 6,7-7,2. Вирулентные штаммы имеют капсулу, образуют кислоту без газа при ферментации некоторых углеводов (глюкоза, мальтоза, манноза, фруктоза, декстрин)

Г. Мак-Кой и Ш. Чепин использовали свер-нутую желточную среду. На ней туляремийная палочка растет в виде нежных мелких колоний, напоминающих капельки росы, затем культура приобретает характер неж-ного шагреневого налета со слабо выраженной слизистой консистенцией. Э. Френсис предложил для выращивания туляремийной палочки питательный агар, содержащий 0,05-0,1 % цистина, 1 % глюкозы и 5-10 % крови. На такой среде рост более пышный и грубый: колонии круглые с гладкой поверхностью, молочного цвета, влажные, со слизистой консистенцией, окружены характерным зеленым ореолом.

F. tularensis в S-форме (вирулентный) имеет два антигена - О и Vi (капсульный антиген)

Основным резервуаром туляремии в природе являются грызуны, среди которых в естественных условиях наблюдаются эпизоотии. Человек заражается только от животных, от человека к человеку возбудитель не передается. Возбудитель обнаружен у 82 видов грызунов и зайцеобразных, наиболее часто встречается у представителей 4 семейств: мышевидных (Muridae), заячьих (Leporidae), беличьих (Sciuridae) и тушканчиковых (Dipodidae).

Заражение человека происходит всеми возможными способами: прямым и непрямым контактом с больными грызунами, их трупами или с предметами, зараженными грызунами; алиментарным (при употреблении пищевых продуктов и воды, инфицированных грызунами), воздушно-пылевым и трансмиссивным путем.

Методы микробиологической диагностики туляремии.

Лабораторная диагностика. В связи с полиморфной клинической картиной ту-ляремии в ее диагностике решающее значение имеют лабораторные методы: бакте-риологический, биологический, серологические реакции и аллергическая проба. Бактериологический метод имеет существенную особенность: выделить возбудителя от больного человека непосредственно не удается. Поэтому исследуемым материалом (пунктат бубона, гной из конъюнктивы, пленка из зева, мокрота, испражне-ния, кусочки органов из трупов грызунов) вначале заражают подкожно белых мышей или морских свинок, а затем уже делают посев крови или материала из органов для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологичес-ким, культуральным (не растет на обычных средах) свойствам, по реакции агглютинации со специфической сывороткой и окончательно - биологической пробой на белых мышах.

F. tularensis можно выделить также путем заражения в желточный мешок кури- ных эмбрионов. Возбудитель легко в нем обнаруживается с помощью метода им-

Мунной флуоресценции. Однако биологические пробы и бактериологические иссле-

Дования по туляремии возможно проводить только в специальных лабораториях. В обычных клинических условиях для диагностики туляремии применяют только серологические реакции (со 2-й нед. развернутая пробирочная агглютинация, РПГА.)

И аллергическую пробу с тулярином. Последняя является наиболее ранним

методом специфической диагностики. При внутрикожной постановке она бывает положительной с 3-5-го дня болезни, при накожной - с 6-8-го дня. В природных очагах туляремии для контроля эпизоотии среди грызунов используют РПГА и ее варианты (РНАг, РТПГА), а также ИФМ с целью обнаружения антигенов туляре-мийной палочки в трупах грызунов, погадках хищных птиц, помете хищников.

Специфическая профилактика. Основным методом предупреждения заболевания людей, проживающих на территории природных очагов туляремии, является вакцинация, осуществляемая с помощью живой (ослабленной) сухой накожной вакцины. Вакцину вводят однократно, иммунитет не менее 5-7 лет.

Туляремия является острым инфекционным природно-очаговым заболеванием с поражением лимфатических узлов, паренхиматозных органов, кожных покровов, иногда глаз, зева, легких и сопровождается выраженной интоксикацией. Заболевание преимущественно встречается в ландшафтах умеренного климатического пояса Северного полушария.

Основным резервуаром и источником инфекции при туляремии являются многочисленные виды диких грызунов, зайцеобразные и др. Основная роль в поддержании инфекции в природе принадлежит грызунам (водяная крыса, обыкновенная полевка, ондатра и др.). Больной человек не опасен для окружающих.

Механизм передачи заболевания множественный, чаще всего трансмиссивный. Возбудитель сохраняется в природе в цикле «клещ-животное», передается сельскохозяйственным животным и птицам клещами и кровососущими насекомыми. Специфические переносчики туляремии – иксодовые клещи. Человек заражается туляремией в результате прямого контакта с животными (снятие шкур, сбор павших грызунов и др.), а также алиментарным путем через инфицированные грызунами пищевые продукты и воду. Часто заражение происходит через кровососущих переносчиков (клещи, комары, блохи, слепни и другие членистоногие). Возможно заражение и аспирационным путем (при вдыхании инфицированной пыли от зерна, соломы, овощей). Зарегистрированы случаи заболеваний людей на производствах, связанных с переработкой природного сырья (сахарные, крахмалопаточные, спиртовые заводы, элеваторы и т.п.), на мясокомбинатах, при забое овец и крупного рогатого скота, на котором имелись инфицированные клещи.

Пути заражения: контактный (через кожу и слизистую оболочку глаз), трансмиссивный (при укусе переносчика), алиментарный (через ЖКТ), аспирационный (через дыхательные пути).

Возбудитель туляремии относится к γ–подклассу прото протобактерий, семейству Francisellaceae, роду Francisella , который включает два вида: F. tularensis и F. philomiragia.

В пределах вида F. tularensis выделяют 4 подвида: F. tularensis subsp. tularensis или nearctica - неарктический, F. tularensis subsp. holarctica – голарктический, F. tularensis subsp. mediasiatica - среднеазиатский и F. tularensis subsp. novicida . Подвид holarctica включает в себя три биологических варианта: japonica - японский биовар, биовар I Ery(S) (эритромицинчувствительный) и биовар II Ery(R) (эритромицинрезистентный).

Внутривидовая дифференциация возбудителя туляремии основывается на различиях подвидов и биоваров по ряду фенотипических признаков: биохимической активности, степени патогенности для человека и животных, чувствительности к некоторым антибиотикам, на особенностях экологии возбудителя и его ареале. На генотипическом уровне подвиды различаются при VNTR – анализе генома. На территории России встречается F. tularensis подвида holarctica с двумя биоварами – I Ery(S) и II Ery(R), циркуляция которых осуществляется главным образом среди грызунов и зайцеобразных. Распространение их также возможно через иксодовых клещей и водные объекты.

Возбудитель туляремии F.tularensis в мазках 1–2 суточной культуры, выращенной на плотных питательных средах, представляет собой кокковидные клетки диаметром 0,3–0,5 мкм. В мазках, приготовленных из культуры с жидких питательных сред, туляремийный микроб имеет форму коротких палочек. В тканях животных, погибших от туляремии, возбудителя обнаруживают в виде коккобактерий. При длительном выращивании на питательных средах туляремийные бактерии проявляют значительный полиморфизм: встречаются как более крупные, шарообразные до 3 мкм в диаметре клетки, так и мельчайшие до 0,1–0,2 мкм.

Туляремийные бактерии неподвижны, грамотрицательны, но окрашиваются бледнее анилиновыми красителями, чем другие грамотрицательные бактерии, размножаются почкованием, спор не образуют, выделяют капсулоподобное слизистое вещество. Слизистую консистенцию культуры выявляют в окрашенных мазках и при эмульгировании бактериальной массы в капле физиологического раствора (культура тянется за петлей). В мазках, окрашенных по Граму, обильную слизь обнаруживают в виде сплошной тонкой сеточки розового цвета.

Бактерии туляремии – факультативные анаэробы. Оптимальная температура их выращивания 36-38 ºС, при более низкой температуре размножение происходит медленнее, а ниже 20 ºС – прекращается. Оптимальная концентрация водородных ионов в средах для выращивания туляремийного микроба 6,8-7,3. Возбудитель туляремии не растет на обычных питательных средах – МПА и МПБ (исключение – F. tularensis subsp. novicida ), а требует для своего выращивания среды, содержащие кровь, яичный желток или их заменители. На этом основана дифференциальная диагностика туляремийного микроба. Из плотных питательных сред, применяемых для выращивания F. tularensis , наиболее распространена свернутая желточная среда Мак-Коя. Культура туляремийного микроба на ней растет в виде извилистого, блестящего, нежного, почти бесцветного, слизистого налета, хорошо снимающегося петлей. Поверхность посева состоит из множества слившихся мелких колоний, напоминающих «шагреневую кожу». Рост в виде отдельных колоний встречается только при посеве из органов животных со скудным содержанием туляремийных бактерий и появляется в более поздние сроки (на 9–12 сутки).

Наравне со свернутой желточной средой Мак-Коя для выращивания возбудителя туляремии используют кровяную среду Емельяновой, FТ-агар, среды, приготовленные на основе сухого агара для выращивания туляремийного микроба, в том числе с добавлением антибиотиков.

Культура в S-форме на кровяной среде Емельяновой вырастает в виде круглых с ровными краями, равномерно выпуклых, гладких, слабо блестящих беловатого цвета гомогенных колоний, размером до 1–2 мм в диаметре. Бактерии, образующие колонии в S-форме, высоковирулентны для лабораторных животных, колонии слабовирулентных штаммов (SR-форма) более крупных размеров. Авирулентные культуры вырастают в R- форме и агглютинируются трипафлавином. Туляремийные бактерии слабо ферментируют до кислоты лишь немногие углеводы и спирты на специальных средах. Среды Гисса для этого не пригодны. Ферментирующая способность у разных подвидов туляремийного микроба неодинакова (таблица 17).

Таблица 17

Характеристика F. tularensis (по подвидам) и F. philomiragia

Признак Подвиды Francisella tularensis Francisella philomiragia
tularensis holarctica media-siatica novicida
Размер, мкм < 0,5 < 0,5 < 0,5 < 1,5 < 1,5
Наличие капсулы + + + н/д
Тинкториальные свойства Гр - Гр - Гр - Гр - Гр -
Подвижность
Рост на стандартных средах + (–) +
Рост на среде с цистеином + + +
Рост в питательном бульоне, 0 % NaCl
Рост в питательном бульоне, 6 % NaCl +(–) +(–)
Оптимальная температура культивирования, о С 25 или 37
Образование H 2 S на среде с цистеином + + + + +
Образование H 2 S на стандартных средах +
Образование индола +
Образование уреазы
Восстановление нитратов
β–лактамазная активность + + + +
Ферментация до кислоты: мальтоза лактоза сахароза D-глюкоза глицерин + – – + + + – – + – – – – – + + (–) – + + + (–) + – + + (–) –
Продукция цитриуллинуреидазы + + + н/д
Продукция индофенолоксидазы +
Продукция каталазы + + + + +
Протеолитическая активность +
Агглютинабельность с противотуляремийной сывороткой + + + +(–)
Моль% G+C ДНК 33–36 33–36 33–36 33–34
% гомологии по гену 16 S рРНК с F. tularensis ATCC 6223 ≥99,8 ≥99,8 ≥99,8 ≥99,8 ≥98,3
Наличие гена lpn, кодирующего синтез белка молекулярной массой 17 kD + + + + +
LD50 для кроликов, м.к. < 101 > 106 > 106 > 106 н/д
Минимальная заражающая доза для мышей, м.к. < 103 < 103 < 103 н/д
Ареал распространения Только на территории Северной Америки На территории северного полушария, за исключением Англии, Исландии и Португалии Район поймы реки Чу и Или (Казахстан) и дельта реки Амударья (Узбекистан). Территория Северной Америки, единичные случаи в Австралии и Тайланде Территория Северной Америки

Примечание: н/д – нет данных, +(–) – признак характерен для большинства выделенных штаммов.

Липополисахарид туляремийного микроба является основным иммунодоминантным антигеном и мишенью специфического антительного ответа макроорганизма на возбудитель. На выявлении специфических туляремийных антител против эпитопов ЛПС основана серологическая диагностика туляремии у человека и животных. Структура и антигенная специфичность ЛПС бактерий F. tularensis трёх основных подвидов (кроме F. tularensis subsp. novicida ) идентична. В отличие от классических эндотоксинов, препараты ЛПС возбудителя туляремии характеризуются биологической инертностью – они являются слабыми индукторами цитокинов и не токсичны для лабораторных животных. Экзотоксин у бактерий туляремии не обнаружен. Для человека высокопатогенен подвид tularensis , подвиды holarctica и mediasiatica умеренно патогенны.

Геном туляремийного микроба представлен хромосомой, размер которой около 1830 т.п.н. У большинства представителей семейства Francisellaceae не обнаружены собственные фаги и плазмиды. Исключение составляет только F.

tularensis subsp. novicida , у которой выявлена мелкая криптическая плазмида pFN. Для обнаружения ДНК возбудителя туляремии в исследуемом материале используется молекулярно-генетический метод – полимеразная цепная реакция (ПЦР). В основе ПЦР – выявление в геноме возбудителя нуклеотидных последовательностей, детерминирующих факторы патогенности F. tularensis . Причина высокой патогенности туляремийного микроба до конца не определена. Из числа возможных факторов вирулентности рассматриваются: липополисахарид (ЛПС), белок размером 23 kD, ферменты биосинтеза пуринов, пептидогликанов, Clp-протеаза теплового шока, белки патогенности Pdp, регуляторные белки MglA и MglB. Все они имеют значение для персистенции патогена в макрофагах – важного этапа в развитии инфекционного процесса. Однако наиболее специфичными из изученных генов являются fopA , отвечающий за синтез наружной мембраны и igl ABCD оперон, кодирующий синтез белка размером 23 kD. Они имеют высокую степень сходства у всех подвидов туляремийного микроба и на их основе осуществляется синтез туляремийных родоспецифичных праймеров для ПЦР.

Генетическую вариабельность подвидов и отдельных штаммов туляремийного микроба связывают с наличием областей дифференциации RD, с вариабельными тандемными повторами (VNTR) и полиморфизмом единичных нуклеотидов (SNP). VNTR- и SNP-типирование F. tularensis позволяет проводить межподвидовую и межштаммовую дифференциацию, устанавливать географическое происхождение возбудителя.

Возбудитель туляремии обладает выраженными аллергизирующими свойствами. Аллергенное действие характерно как для живых, так и убитых бактерий туляремии – различной степени вирулентности. На этом свойстве F. tularensis основан аллергический метод диагностики туляремии у человека. Туляремийный микроб патогенен для многих видов животных и человека. Из лабораторных животных высокую чувствительность к туляремии проявляют белые мыши и морские свинки. При подкожном заражении инфицированным материалом белые мыши в среднем погибают на 3–4 сутки, и при вскрытии у них обнаруживают: резкую гиперемию и отечность сосудов подкожной клетчатки; воспалительный инфильтрат в месте введения материала; увеличение, гиперемию и уплотнение регионарных лимфатических узлов, печени, селезенки; гиперемию стенок кишечника.

Морские свинки при подкожном заражении инфицированным материалом погибают на 6–9 сутки. Патологоанатомические изменения в органах морской свинки при гибели от туляремийной инфекции хорошо выражены. При вскрытии у них обнаруживают: гиперемию и отек сосудов подкожной клетчатки, воспалительный инфильтрат с геморрагиями и участками некроза в месте введения материала; резкое увеличение, гиперемию и уплотнение регионарных лимфатических узлов, печени, селезенки. На поверхности и в глубине ткани селезенки, печени хорошо заметны некротические узелки сероватого цвета («саговая селезенка»). В брюшной полости накапливается серозно-геморрагический экссудат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ